Golden Gate克隆在2008年由Engler等人提出,是依赖IIS型限制酶的无缝克隆技术,能媲美Gibson Assembly,主要用于多片段克隆组装。实验步骤与传统克隆技术相似,但限制性内切酶酶切原理不同。传统酶切使用的TypeII型限制性内切酶通常识别4-8 bp的回文序列,并在识别序列内部切割产生粘性末端或平末端。 Golden Gate克隆技术通过T...
使用Gateway 克隆系统会产生含有一个编码8个氨基酸的attB重组痕迹的结构,但是Golden Gate连接能设计成无痕的,并且比许多商业化的克隆方法都要便宜。 02Golden Gate和合成生物学 合成生物学已经将Golden Gate克隆方法用在了分子克隆策略中,有时称其为MoClo,这个策略利用了IIS型限制酶BsaI和BpiI/BbsI可一次性有效组装多达...
IIS型限制性内切酶切割DNA产生的粘性末端通常为2个碱基或4个碱基。在连接反应中，粘性末端的碱基数越多，连接产物的保真度越高，因此Golden Gate Assembly通常采用能够产生4碱基粘性末端的IIS限制酶，常用的有BsaI、BsmBI和BbsI 。三种IIS型限制性内切酶的特异性可分别记为：BsaI (GGTCTC 1/5),BsmBI (CGTCTC 1/...
IIS型限制性内切酶切割DNA产生的粘性末端通常为2个碱基或4个碱基。在连接反应中,粘性末端的碱基数越多,连接产物的保真度越高,因此Golden Gate Assembly通常采用能够产生4碱基粘性末端的IIS限制酶,常用的有BsaI、BsmBI和BbsI。 三种IIS型限制性内切酶的特异性可分别记为:BsaI (GGTCTC 1/5),BsmBI (CGTCTC 1/5),...
Golden Gate Assembly Protocol for using NEBridge® Golden Gate Assembly Kit (BsmBI-v2) (NEB #E1602) 3.现在RNAi所用的shRNA则需要用Gibson Assembly Gibson Assembly® Gibson Assembly Cloning - addgene Gibson Assembly® Master Mix – Assembly (E2611) ...
在连接反应中,粘性末端的碱基数越多,连接产物的保真度越高,因此Golden Gate Assembly通常采用能够产生4碱基粘性末端的IIS限制酶,常用的有BsaI、BsmBI和BbsI 。 三种IIS型限制性内切酶的特异性可分别记为:BsaI (GGTCTC 1/5),BsmBI (CGTCTC 1/5),BbsI (GAAGAC 2/6)。除此之外,能够产生3碱基粘性末端的IIS型...
图1植物细胞器基础编辑器Golden Gate assembly system。 为此,首先开发了Golden Gate assembly system来构建叶绿体靶向DdCBE(cp-DdCBE)质粒或线粒体靶向DdCBE(mt-DdCBE)质粒(图.1)。表达质粒编码由叶绿体转运肽(CTP)或线粒体靶向序列(MTS)、TALE N端或C端结构域、分裂的(DddAtox半体(G1333N、G1333C、G1397...
Learn the steps involved in Golden Gate assembly and how to efficiently plan and simulate your experiment.
Batch Golden Gate Cloning Perform Golden Gate Cloning INSIDE THE VIDEO Assess your DNA sequences, arrange your fragments and design primers, simulate Golden Gate cloning, and check your assembly. LENGTH 6 minutes Batch Golden Gate Cloning
导读:无缝克隆技术是时下最流行的质粒构建技术,几乎每个分子生物学实验室都在使用。之前我给大家详细讲解了Gibson Assembly的实验设计和操作流程,那么这次给大家介绍另外一种无缝克隆方法——Golden Gate Assembly,希望能对大家的质粒构建实验有所帮助。说到分子克隆,几乎每个做过质粒构建的小伙伴都知道Gibson Assembly,这...