细胞内表达的GFP-LC3-RFP-LC3ΔG融合蛋白经Atg4内肽酶加工，断裂成GFP-LC3和RFP-LC3ΔG，后者缺乏与膜结合所需的C末端甘氨酸。GFP-LC3和RFP-LC3ΔG分别充当自噬底物和内对照。GFP-LC3相对于RFP-LC3ΔG的比值与自噬强弱呈负相关。这种方法可以使用流式细胞仪或荧光酶标仪检测自噬。2.3.4 Keima Keima是一种独...
自噬病毒工具，便于直接感染目的细胞后直观地观察细胞自噬的整体水平。自噬单荧光标记慢病毒 吉满自主研发出单荧光(绿光或红光)标记的自噬指示产品，当细胞内没有自噬发生时，荧光-LC3融合蛋白会均匀地分散在细胞质中，一旦细胞发生自噬活动，荧光-LC3融合蛋白就会聚集并转位到自噬体膜，此时在荧光显微镜下可清晰地观察到...
因此要准确分析自噬活性，就必须评估自噬的动态变化，即“自噬流”（Autophagic Flux）。自噬流目前常用的检测方法有GFP-LC3-RFP-LC3ΔG。GFP-LC3在自噬溶酶体中很不稳定，而RFP-LC3ΔG则仍可以留在细胞质中，同时观察两种荧光颜色，可以用于监测自噬通量。但是上述这种方法由于需要转染质粒，一方面实验操作麻烦，另一...
以下是mRFP-GFP-LC3自噬评判标准: 自噬囊泡膜的形成:正常情况下,细胞内的mRFP-GFP-LC3表达时呈现为一个均匀分布的绿色荧光信号。当自噬过程发生时,mRFP-GFP-LC3会在囊泡膜上形成点状或环状的荧光信号。观察细胞中是否出现这些点状或环状的信号,可以评判自噬囊泡膜的形成。 自噬囊泡膜的积累:正常情况下,自噬囊泡...
（3）检测自噬流，即在荧光显微镜下采用GFP-RFP-LC3等融合蛋白来示踪自噬体形成以及降解。这种检测方法是使用GFP-RFP标记及追踪LC3，利用GFP（绿光）在酸性环境中淬灭的特性来观察自噬，是目前自噬研究最常用的方法之一，其具体的作用原理可见图3。图3 GFP-RFP-LC3作用原理图 汉恒生物作为国内首个研究自噬的公司，...
双荧光穿梭质粒系统检测 自噬形成时,mRFP-GFP-LC3质粒转移至自噬体膜,在荧光显微镜下形成多个明亮的绿色或黄色荧光斑点。 当自噬溶酶体形成后,酸性环境使GFP荧光淬灭,GFP的减弱可指示溶酶体与自噬小体的融合形成自噬溶酶体,即由于GFP荧光蛋白对酸性敏感,当自噬体与溶酶体融合后GFP荧光发生淬灭,此时只能检测到红色荧光;...
mrfp-gfp-lc3 是一种用于检测自噬过程的荧光报告系统,由 mRFP-GFP 融合蛋白和 LC3 蛋白组成。mRFP-GFP 融合蛋白能够反映自噬泡的融合过程,LC3 蛋白则可以作为自噬体的标志物。mrfp-gfp-lc3 自噬评判标准是基于这一荧光报告系统,通过对细胞内 mRFP 和 GFP 信号的动态变化以及 LC3 puncta 的形成来评估自噬的活性和...
手段有:通过westernblot检测LC3的剪切;通过电镜观测自噬体的 形成;在荧光显微镜下采用GFP〔-RFP〕-LC3等融合蛋白来示踪自噬 体形成以与降解。近几年对自噬流的研究日趋增多,针对于此我们汉 恒生物科技〔XX〕XX自主研发了用于实时监测自噬(流)的 mRFP-GFP-LC3腺病毒,mRFP用于标记与追踪LC3,GFP的减弱可指示 ...
这可能是由于目前缺少检测斑马鱼体内自噬的工具 所致。为了进一步在活体中研究斑马鱼的自噬,我们培育了转基因的GFP-Lc3 和GFP-Gabarap的斑马鱼。 结果 斑马鱼Lc3是在胚胎发生的咽胚期由II转化来的 酵母Atg8蛋白及其在哺乳动物中与之同源的LC3是发生中的吞噬泡和发育 完成的自噬体的特异性标记物。GABARAP是哺乳动物中...
LC3-GFP质粒是一种用于研究细胞自噬过程的重要工具,通过观察自噬体的形成和动态变化,可以深入探索细胞自噬的机制和调控。在使用LC3-GFP质粒进行实验时,需要注意实验技能和经验、配合其他实验方法和试剂、阅读相关文献和说明书、遵循实验操作规程和安全注意事项等方面的问题...