调整引物长度 📏 缩短引物的长度可以降低GC含量,从而提高引物的特异性。你可以根据PCR反应的具体需求,适当调整引物的长度。 重新设计引物 🎨 如果第一种方法不奏效,可以尝试使用其他引物设计软件,比如Primer3或OligoCalc,重新设计引物。这样可以增加引物的特异性,同时降低GC含量。 调整PCR反应条件 🧪 你可以尝试减少...
gc含量太低的引物不可以用。同一碱基连续出现不应超过5个，GC含量一般40-60%，GC含量太低导致引物Tm值较低，使用较低的退火温度不利于提高PCR的特异性，GC含量太高也易于引发非特异扩增。引物长度一般在15~30碱基之间：引物长度（primer length）常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为...
-The enzyme, primer, Mg2+, and/or dNTP concentration was too high. -The annealing temperature was too low for the primers being used. -Too many cycles were used. -The annealing and extension times were too long. -Bad or old primers. ...
这一公式适用于较短的寡聚核苷酸序列。对于更长的寡聚核苷酸，tm值则通过另一个公式计算：Tm=81.5+16.6xLog10[Na+]+0.41(%GC)–600/Size。在这里，Size代表引物的长度。这些计算公式为实验设计提供了便利，确保了引物的稳定性和特异性。实验中，可以通过使用如Primer5.0、DNAMAN或DNASTAR等软件...
What should the final primer concentration be in my PCR? 问题解决指南 PCR Troubleshooting Guide 实验技巧 Phusion 对退火温度的要求与大多数 PCR 酶不同。请访问 www.neb.cn/tmcalculator,帮助您确定最佳的 Phusion 退火温度。 引用& 技术文献 引用文献 ...
3.引物的设计与合成利用primerpremier6.0和oligo7.0软件设计引物,筛选引物的参数设置为长度在20-30bp之间,gc含量在60%-75%之间,tm>70℃,tmdifference<1℃。(1)引物长度小于20bp的扩增情况见图19,两对引物(参数见图20)均无目的扩增产物;引物长度大于30bp的扩增情况见图21两对引物(参数见图22)也均无目的扩增...
What should the final primer concentration be in my PCR? What are the properties of this polymerase (fidelity, product ends, max amplicon, modified base incorporation, etc.)? What are the stability and storage requirements for NEB's Taq and OneTaq DNA Polymerases? Can Taq/OneTaq® DNA Poly...
如果GC buffer +LA扩不出还可以考虑用TaKaRa的PrimerStAR虽然有广告嫌疑,虽然不喜欢R货。但是确实好使,我有几个片段在3k作用,GC含量70%+,用gc buffer I和II都试过不好使,后来用primerstar 68°两步法扩出来了 9.NEB现在有两种DNA聚合酶适合扩增高GC含量的片段: 1.One Taq DNA聚合酶,非常适用于扩增高GC含量...
就这两个数来看其实可以用了.Tm在50-60,GC%在35-50其实都可以.重要的数据是,你的false priming的预测如何,就是预测的错配概率是多少.另外是否有茎环结构,引物二聚体概率多少,这些是关键数据.你用软件预测一下,都是可以算的.只要这些的概率不大,就没什么问题的.另外你的primer多长?如果不放心的话可以在增加...
DNA strands must be broken apart (denatured), and primers must be able to bind to the correct position on the DNA strand (annealing) for amplification. The distribution of nucleotides can influence both processes: DNA templates with high GC content may require higher denaturation temperatures, ...