FNPI-PCR(融合引物巢式集成PCR)方案一.技术背景基因组步移策略常用于获取基因全序列信息或T-DNA插入片段侧翼序列信息。通过设计特异性序列与高度兼并的9条融合简并引物,分别与基因特异性引物完成PCR反义,获得已知序列的侧翼序列信息(图1)。相比较常用的Tail-PCR而言,具有1)扩增片段长;2)耗时短;3)特异性高等优点。
第1轮PCR组分: 第2轮PCR组分: 1.5%琼脂糖电泳检测PCR产物,如果有条带进行回收。 第3轮PCR组分: 1.5%琼脂糖电泳检测PCR产物。 2.3.2 反应条件 反应条件按照如下参数进行设置: 参考文献:Wang, Z., Ye, S., Li, J., Zheng, B., Bao, M. & Ning, G.(2011). Fusion primer and nested integrated PC...