FITC与氨基反应原理: FITC与氨基反应是一种亲核进攻取代反应,即亲核试剂(氨基基团)攻击亲电试剂(异硫氰基团的碳原子)产生生成物。该反应通常在碱性pH条件下进行,例如使用氢氧化钠(NaOH)或碳酸钠(Na2CO3)的缓冲溶液。FITC分子中的异硫氰基具有较强的亲电性,易于受到亲核试剂(含有自由氨基的分子)的亲核进攻。 亲核进...
FITC是荧光标记中常用的试剂之一,其具有较高的有机溶剂溶解性,因此可广泛用于官能化合物的氨基化反应。此类反应的目的是将氨基基团引入所需材料,从而赋予其新的性质和应用潜力。 3. FITC与氨基反应的基本原理 FITC与氨基反应的基本原理是亲电取代反应。在该反应中,FITC中的异氰酸酯基团与官能化合物中的氨基发生反应...
FITC与氨基的反应需要一定的条件,主要包括pH值、温度和反应时间等因素。一般情况下,反应pH值为8.0-9.0,温度为室温或4℃,反应时间为1-2小时。此外,在反应过程中还需要加入一定量的缓冲液来维持反应体系的稳定性。 五、FITC标记蛋白质的步骤 1. 准备FITC溶液:将FITC溶解在二甲基亚砜(DMSO)中,制备出一定浓度的FITC...
FITC与氨基反应通常发生在碱性条件下,碱性环境有助于提供氨基的亲核性。碱性环境还可以促进反应速率和产物稳定性。 机理解析 FITC与氨基反应发生的机理如下: 1. FITC中的异硫氰酯官能团(N=C=S)受到氨基的亲核进攻,形成临时亲电子簇(N=C=S←Nu)。 2. 临时亲电子簇中的离域电子对重新排列,形成氨基酯过渡态。
FITC-NHS是一种荧光素衍生物,常用于将荧光标记引入生物大分子中,以便进行荧光显微镜等技术下的可视化和定量分析。它的NHS部分可以与生物分子中的氨基官能团发生反应,形成稳定的酰胺键连接。以下是关于FITC-NHS与生物大分子中氨基基团的反应过程: 1. 活性酯化反应:FITC-NHS通过其活性酯(NHS酯)部分与生物分子中的游离氨...
FITC-NHS是一种荧光素衍生物,常用于将荧光标记引入生物大分子中,以便进行荧光显微镜等技术下的可视化和定量分析。它的NHS部分可以与生物分子中的氨基官能团发生反应,形成稳定的酰胺键连接。以下是关于FITC-NHS与生物大分子中氨基基团的反应过程: 1. 活性酯化反应:FITC-NHS通过其活性酯(NHS酯)部分与生物分子中的游离氨...
FITC与FAM相比更具活性,通常FITC与多肽反应只需调节PH至碱性条件,如PH>8即可快速反应。 FAM与多肽的氨基反应的话,和正常脱水缩合反应一样,不仅需要使用碱试剂 调节PH,还需要加入缩合剂(固相树脂上反应,如加入HATU或HBTU)。 3、连接位点有所不同。 当FITC修饰在多肽N端时,通常必须要插入Linker,常见的如Ahx(6-氨...
FITC主要是与巯基反应,如还原型半胱氨酸的侧链,尤其是多肽或蛋白中的氨基。 在化学合成过程中引入荧光标记是很容易的。 如在固相合成过程中,FITC可以与赖氨酸(Lys)或被选择性地脱保护的鸟氨酸(ornithine)侧链,或合成过程中的多肽N端氨基反应。当在N端标记时,建议在最后一个氨基和由异硫氰酸酯与氨基反应产生的...
FITC-NHS (Fluorescein Isothiocyanate N-Hydroxysuccinimide Ester) 是一种用于在生物分子上进行荧光标记的试剂。其活性基团是 NHS 部分,这是一种具有活性的酯化试剂,通常用于与氨基 (NH2) 反应,将 FITC 标记连接到生物分子上,从而实现荧光标记。这个过程通常称为胺基化反应。
3. 活化FITC-COOH:向FITC-COOH溶液中加入活化试剂,常用的活化试剂为N,N'-环己基碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)。这些活化试剂将激活FITC-COOH中的羧酸官能团,使其具有更高的反应活性。 4. 反应:将活化的FITC-COOH溶液与氨基化合物溶液混合,并在适当的反应条件下进行反应。通常情况下,反应在室温下进行...