1)制备溶于0.1m碳酸钠缓冲液(pH9.0)的待标蛋白溶液，浓度≥2mg/ml。2)将FITC溶解在无水DMSO中，制成1mg/ml溶液。3)将50μFITC溶液添加到1ml蛋白溶液中，可根据每次5μ量轻轻搅拌蛋白溶液。4)加入所需FITC后，反应液在4°C避光孵化8h。5)加入NH4CI，使其终浓度达到50mm，4°C终止反应2h。6)加入二甲...
一、FITC蛋白质标记方法 1.FITC与蛋白质直接偶联法: 此方法将FITC直接与蛋白质反应,形成共价键连接。一般会选择天然氨基酸残基(如赖氨酸和组氨酸)中的氨基或脯氨酸中的酚羟基进行反应。实验步骤如下: a. 蛋白质溶液与FITC按照一定比例混合,通常蛋白质的浓度为1-5 mg/mL,FITC的浓度为1-10 mg/mL。 b.在室温下...
蛋白标记是指将特定的蛋白质与荧光染料结合,使其能够在荧光显微镜下被观察到。以下是一种常用的FITC蛋白标记方法: 1.准备工作: -FITC染料:FITC染料可从商业供应商购买,也可以通过化学合成得到。 -蛋白质:选择需要标记的蛋白质。常用的蛋白质包括抗体、酶、载体蛋白等。 -缓冲液:选择适当的缓冲液,如PBS(磷酸盐...
FITC标记蛋白质的方法主要分为两个步骤:1)蛋白质的准备,2)FITC的标记。 1)蛋白质的准备: a.选择目标蛋白质:根据实验需求选择要标记的蛋白质,可以是纯化的蛋白质或者从细胞提取的蛋白质。 b. 确定蛋白质浓度:使用BCA或者Bradford等方法确定蛋白质的浓度,以便后续计算FITC的用量。 2)FITC的标记: a.准备FITC溶液...
化学共价结合是FITC标记蛋白质最常用的方法之一、该方法利用FITC分子中的异硫氰基与蛋白质中的氨基酸侧链上的羟基、胺基、硫醇基等反应,形成稳定的共价键。常用的化学共价结合方法有直接标记和间接标记两种。 直接标记方法是将FITC直接与蛋白质反应制备成FITC-蛋白质共价偶联物。该方法简单快速,但容易引起蛋白质的损伤和...
检测方法常用的方法包括以下几种：1. 荧光染色法荧光染色法是一种常用的检测方法，其基本原理是利用荧光染料与蛋白质分子结合，产生荧光信号。该方法具有高灵敏度和特异性，但操作过程相对复杂。2. 直接荧光法直接荧光法是利用荧光光谱法直接检测FITC标记蛋白质分子的荧光信号。该方法具有简单、快速和灵敏度高等优点，但...
异硫氰酸荧光素FITC标记蛋白 FITC（异硫氰酸荧光素）是一种荧光素衍生物。可作为荧光探针应用于制备分子生物学或糖类聚合物的结合物分子，FITC常用作蛋白质或多糖的不同底物的标记试剂。当FITC在碱性溶液中蛋白反应时，主要是蛋白质上赖氨酸的ε-氨基与荧光素的硫碳胺键(thiocarbmide)结合（形成硫碳氨基键），...
产品名称:FITC标记乳白蛋白/乳铁蛋白,荧光素标记蛋白 英文名称:FITC-lactalbumin/Lactoferrin α-乳白蛋白(α-La,α-Lactalbumin)广泛存在于哺乳动物(牛、山羊、骆驼、马、荷兰猪、兔等)和人的乳汁中。 牛…
⑥纯化标记蛋白:为了去除未结合的 FITC,可以使用凝胶过滤、透析或离心等方法对标记蛋白进行纯化。 ⑦储存标记蛋白:将纯化后的标记蛋白储存于适当的缓冲液中,在 4°C 下避光保存。 需要注意的是,FITC 标记蛋白的效率和特异性可能会受到多种因素的影响,如蛋白质的性质、缓冲液的组成、标记条件等。因此,在进行 FITC...