当抗原以l一5ug/m1浓度被动吸附于固相时,大多数蛋白抗原的60%～80%至少会以一个单层而稳定的吸附于固相,这样在固相上的总的抗原就?会缺乏。如果500～800ng抗原稳定的吸附于微孔板孔,对含500ug/ml抗体的血清的1:10 000稀释可提供大于10倍过量的抗原,考虑到相互作用的合理的Keq,吸附抗原的有限性不能解释这个结...
在ELISA中一般有两次抗原抗体反应,即加标本和加酶结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间,这一保温过程称为温育(incubation),有人称之为孵育,在ELISA中似不恰当。 ELISA属固相免疫测定,抗原、抗体的结合只在固相表面上发生。以抗体包被的夹心法为...
ELISA 试验中,固相载体的要求有A、与抗原或抗体有较高的结合容量且结合稳定B、抗原或抗体与其结合后,应保持活性C、固相化方法应简便易行,快速经济D、能结合亲和素或链酶亲和素等大分子蛋白质E、抗原或抗体与其结合后丧失免疫活性搜索 题目 ELISA 试验中,固相载体的要求有 A、与抗原或抗体有较高的结合容量且...
用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。
接着,加入酶标记的抗大鼠 IgG 二抗,它能够与已结合的 IgG 亚型抗体再次特异性结合,形成稳定的 “三明治” 结构:固相抗原 - 大鼠 IgG 亚型抗体 - 酶标记二抗。此时加入底物,在酶的催化作用下,底物发生化学反应,产生可检测的信号,通常表现为颜色变化。颜色的深浅与样本中目标 IgG 亚型抗体的含量成正比。科研人员通...
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②标本用联有热变性IgG的固相吸附剂处理; ③检测抗原时,可用2-巯基乙醇加入到标本稀释液中使RF降解 样本实验前准备: ELISA试剂盒液体样本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。 (1)血清 室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,...
DHEA ELISA试剂盒是一种基于竞争结合原理的固相酶联免疫吸附测定(ELISA)。微孔板表面涂有一层针对DHEA分子抗原位点的多克隆(兔)抗体。在第一次孵育过程中,样本中的内源性DHEA与DHEA-辣根过氧化物酶结合物竞争与包被抗体的结合位点。孵育完成后,未结合的结合物被洗去,固相部分再与底物溶液孵育。通过加入终止液停止显...
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(ELISA)是将已知抗原或抗体吸附在固相载体上,通过抗原抗体特异性结合吸附待测样品中的抗体或抗原后,加酶标抗体(酶与抗体或抗原结合后,既不改变抗体或抗原免疫反应的特异性,又不影响酶本身活性)和底物后,在相应酶底物的作用下生成有色物质,其颜色深浅与标记物中相应的抗体或抗原的含量呈正比,由此可测定抗原或抗体的...