实验原理 4Firefly luciferase和Renilla luciferase之所以被称为报告基因,是因为在基因表达调控研究时,利用两者表达产生的荧光比值可以监控、证实微观层面上的分子间的相互作用。具体做法是:将靶基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在Firefly luciferase基因的上游,或把3’-UTR区或lncRNA结合序列克隆在Firefly luciferase基因...
海肾萤光素酶(Renilla luciferase)是一种分子量约为36 kDa的蛋白,在氧气存在的条件下,可以催化腔肠素(coelenterazine)氧化成coelenteramide,在氧化的过程中会发出波长为480nm左右的生物荧光。两种生物荧光都可通过化学发光仪进行测定。检测原理如图所示: 图1:萤火虫和海肾萤光素酶检测原理图 通常将目的基因的5′...
海肾萤光素酶(Renilla luciferase)是一种分子量约为36 kDa的蛋白,在氧气存在的条件下,可以催化腔肠素(coelenterazine)氧化成coelenteramide,在氧化的过程中会发出波长为480nm左右的生物萤光。两种生物萤光都可通过化学发光仪进行测定。检测原理如图所示: 图1:萤火虫和海肾萤光素酶检测原理图...
利用这一特性,将这两种荧光素酶配合,即可形成十分有效的双荧光素酶报告基因系统,其中Ranilla luciferase通常作为内参照。其原理如下: 双荧光素酶活性检测试剂盒本试剂盒提供了一体化形式的双荧光素酶检测系统。采用通用裂解缓冲液,适合于两种荧光素酶活性的保持,且与其他类型的报告基因检测和蛋白含量检测兼容。优化的...
因此,双报告基因检测可以通过减少外部影响来获得更可靠的实验数据。REASCIBIO双萤光素酶报告基因检测试剂盒(Dual-Luciferase Reporter Assay Kit)提供了一种有效的双报告基因检测方法,在同一个样品中先以萤光素(Luciferin)为底物来检测萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase),后以腔肠素(Coelenterazine)为底物来检测海肾萤光...
(Dual-Lumi™ Luciferase Reporter Gene Assay Kit,Dual- Lumi™ Luciferase Assay Kit),简称Dual-Lumi,是一种无需洗涤或收集细胞的用化学发光法先后直接测定细胞内萤火虫萤光 素酶(firefly luciferase)和海肾萤光素酶(sea pansy (Renilla reniformis) luciferase,简称Renilla luciferase)的高灵敏度, 高信号稳定性...
实验原理 4Firefly luciferase和Renilla luciferase之所以被称为报告基因,是因为在基因表达调控研究时,利用两者表达产生的荧光比值可以监控、证实微观层面上的分子间的相互作用。具体做法是:将靶基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在Firefly luciferase基因的上游,或把3’-UTR区或lncRNA结合序列克隆在Firefly luciferase基因...
利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点,把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因(firefly luciferase)的上游,构建成荧光素酶报告质粒。然后转化烟草,测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。为了减少内在的变化因素对实验准确性的影响,将带有海...
利用荧光素酶与底物结合发生化学发光反应的特点,把感兴趣的基因转录的调控元件克隆在萤火虫荧光素酶基因(firefly luciferase)的上游,构建成荧光素酶报告质粒。然后转化烟草,测定荧光素酶活性。通过荧光素酶活性的高低判断性刺前后或不同刺激对感兴趣的调控元件的影响。为了减少内在的变化因素对实验准确性的影响,将带有海...
原理:一个载体上有两个报告基因,一个是LUC基因(萤火虫荧光素酶),一个是RLUC(海参荧光素酶),萤火虫荧光素酶由待检测的启动子调控,如果目标蛋白能够与该启动子结合,与对照蛋白相比就能够调控LUC的荧光强度。RLUC由35S启动子调控,该启动子不受目标蛋白影响,RLUC的强度作为内参均一化LUC的强度,用于去除因叶片...