实验原理 4Firefly luciferase和Renilla luciferase之所以被称为报告基因,是因为在基因表达调控研究时,利用两者表达产生的荧光比值可以监控、证实微观层面上的分子间的相互作用。具体做法是:将靶基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在Firefly luciferase基因的上游,或把3’-UTR区或lncRNA结合序列克隆在Firefly luciferase基因...
实验原理 4 Firefly luciferase和Renilla luciferase之所以被称为报告基因,是因为在基因表达调控研究时,利用两者表达产生的荧光比值可以监控、证实微观层面上的分子间的相互作用。具体做法是:将靶基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在Firefly luciferase基因的上游,或把3’-UTR区或lncRNA结合序列克隆在Firefly luciferase基...
实验原理 4 Firefly luciferase和Renilla luciferase之所以被称为报告基因,是因为在基因表达调控研究时,利用两者表达产生的荧光比值可以监控、证实微观层面上的分子间的相互作用。具体做法是:将靶基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在Firefly luciferase基因的上游,或把3’-UTR区或lncRNA结合序列克隆在Firefly luciferase基...
双荧光素酶报告（Dual-Luciferase Reporter）实验是一种常用的遗传调控元件研究手段，通过构建包含荧光素酶基因的报告质粒，如将感兴趣的基因调控元件插入萤火虫荧光素酶（firefly luciferase）上游，以及加入海肾荧光素酶（Rinilla luciferase）作为对照，来评估基因表达变化。这项技术起源于1990年，经过30年的...
后期,我们还可以进行启动子截短,进一步验证关键变异。具体操作可以参考Promega公司的Dual-Luciferase® Reporter Assay System。难点在于原生质体的抽提质量。通过这些实验,我们希望能够更深入地了解启动子活性与基因表达的关系,为植物抗逆性的研究提供更多有价值的信息。0 0...
双荧光素酶报告基因实验介绍Dual-luciferase reporter gene assay introduction 萤火虫和海肾荧光素酶都具有快捷、 简便、 灵敏度高的检测特点, 被公认为是理想的报告基因, 因为它们具有完全不同的进化起源、酶学结构和底物要求。 萤光素酶报告基因的测定需要用光度计或多功能微孔板检测仪, 且发光强度与荧光素酶的数量...
按照实验需要,可设置3孔-5孔重复。 ②配制萤火虫萤光素酶反应工作液和海肾萤光素酶反应液,即萤火虫萤光素酶底物(50 ×)和海肾萤光素酶底物(50×)。 分别用对应的缓冲液稀释至1×工作液。并孵育至室温。 ③加入100 μL萤火虫萤光素酶反应液,震板混匀,检测萤火虫萤光素酶的活力,检测尽量在...
dual-luciferase 双荧光素酶报告系统 作者：windyrain 2008-05-29 21:54:33 标签：杂谈 双荧光素酶报告基因测试∶结合萤火虫和海洋腔肠荧光素酶先进的共报告基因测试技术 在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时,通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因(比如CAT,β-Gal,GUS)不够便利,因为各自...
Dual-Luciferase®双荧光素酶报告基因检测系统中含有在同一细胞中同时表达的两种荧光素酶。通常,报告基因实验中往往会受到各种实验条件的影响,共转染的“对照”报告基因会作为内对照,为试验提供一基准线。实验报告基因经过内参照的处理可以减小细胞活性和转染效率对实验的影响,因此双报告系统减少了外部干扰,使得实验数据更...
Dual-Luciferase® Reporter 1,000 Assay System Passive Lysis 5× Buffer 30ml E1941 描述：普洛麦格公司的双荧光素酶报告基因(DLR™)检测系统为双报告基因检测提供有效手段。在DLR™ 检测中，萤火虫(Photinus pyralis)荧光素酶和海肾(Renilla reniformis)荧光素酶可在单个样品中连续测量。测量过程是：加入荧光...