在细胞实验中，野生型 T7 聚合酶产生的未纯化 mRNA 引发的 IFN 信号最强，HPLC 纯化后减弱，T7-68 产生的未纯化 mRNA 引发的 IFN 信号更低。T7-68 产生的未纯化 mRNA 转染 HeLa 细胞后，GFP 表达比野生型 T7 聚合酶产生的 mRNA 高 8 倍。研究结论 工程化的 T7-68 RNA 聚合酶可提高共转录加帽效率...
🦋 在昆虫中,通常认为不存在像哺乳动物那样的非特异性干扰素反应。然而,有迹象表明,非特异性dsRNAs,例如不靶向任何昆虫基因的绿色荧光蛋白(GFP)衍生的双链RNA(dsRNA-GFP),可以在昆虫组织中诱导生理效应。🐝 给蜜蜂注射非序列特异性dsRNA可以减少病毒拷贝数,表明dsRNA,一种病毒病原体相关分子模式(PAMPs),可以在蜜蜂...
图3 在 IVT 反应过程中形成 3′-延伸的 RNA 副产物。(A) 使用 dsRNA 特异性抗体 (J2) 对三种不同的 mRNA 序列(CLuc、RFP 和 GFP)进行 dsRNA检测。 3. 免疫信号通路中,dsRNA作为重要的病原分子模式(PAMPs),能够激活天然免疫系统中的关键受体(如RIG-I、MDA5和TLR3)。这些受体通过识别dsRNA,引发干扰素(IFN...
所采用 Wizard® Megapreps DNA Purification Resin 纯化线性化质粒模板, Oligo-dT 亲和层析来纯化 IVT 反应液,Dot Blot 检测 dsRNA 含量。结果发现,对于 3 种不同的 mRNA 原液来说,Fluc mRNA 原液中 dsRNA 含量低于 1%,而 GFP mRNA 原液或者...
载体pch-sgfp由他人惠赠。一、实施例实施例1双元靶标dsrna(ras-mapk-dsrna)的合成方法,步骤如下:1、松材线虫cdna的制备采用trizolreagent提取总rna,步骤如下:1)rna提取过程中所用ddh2o、离心管和枪头等用0.1%的depc处理。2)将松材线虫收集于1.5ml离心管中,液氮速冻,加入200μltrizol,用微量组织匀浆器充分研磨...
所采用 Wizard® Megapreps DNA Purification Resin 纯化线性化质粒模板, Oligo-dT 亲和层析来纯化 IVT 反应液,Dot Blot 检测 dsRNA 含量。结果发现,对于 3 种不同的 mRNA 原液来说,Fluc mRNA 原液中 dsRNA 含量低于 1%,而 GFP mRNA 原液或者 COV-Spike mRNA 原液中检测到>1%的较高水平dsRNA。
所采用 Wizard® Megapreps DNA Purification Resin 纯化线性化质粒模板, Oligo-dT 亲和层析来纯化 IVT 反应液,Dot Blot 检测 dsRNA 含量。结果发现,对于 3 种不同的 mRNA 原液来说,Fluc mRNA原液中 dsRNA 含量低于 1%,而GFP mRNA原液或者COV-Spike mRNA原液中检测到>1%的较高水平dsRNA。
例如,瞬时转染可以用报告基因作为信号,其中所述的报告基因例如荧光标记,例如绿色荧光蛋白(GFP)。离体(exvivo)细胞的稳定转染可以用提供经转染细胞对特定环境因素(例如抗生素和药物)的抗性例如潮霉素B抗性的标记来确保。E6AP特异的dsRNA分子也可以插入载体,并用作人类患者的基因治疗载体。基因治疗载体可以通过例如静脉内...
地中海果蝇是影响全世界水果和蔬菜生产的主要害虫,其防治主要依靠杀虫剂。双链 RNA(dsRNA)能够下调内源基因,从而通过 RNA 干扰(RNAi)影响害虫和病原体的基本生命功能。然而,这一策略尚未在地中海果蝇中得到应用。 该研究中,通过向成虫注射体外转录的基因特异性dsRNA筛选七个候选靶基因。与dsGFP的对照处理的Ceratitis...
诱导表达研究利用荧光素酶报告细胞系 RTG-P1 和含有荧光素酶序列 (dsRNA-Luc) 或错配序列 (dsRNA-GFP) 的 dsRNA,并测量随后的发光强度。抗 CSV 研究使用 dsRNA-CSVseg7 和 dsRNA-CSVseg10 分别靶向 CSV 片段 7 和 CSV 片段 10。通过病毒滴定和 RT-qPCR 测量病毒复制的抑制。利用长 dsRNA 可以容纳比 ...