数字PCR也叫Digital PCR(dPCR),是近几年发展起来的一种核酸定量分析技术。相较于传统荧光定量PCR来说,数字PCR对结果的判定不依赖于扩增曲线循环Ct值,不受扩增效率的影响,能够直接读出DNA的分子个数,能够对起始样本核酸分子绝对定量。 数字PCR基本原理是将一个样本分成几十到几万份,然后再将其分配到不同的反应单元...
2. dPCR的基本原理 dPCR是将PCR反应分成多个微小反应体系,并在每个反应体系中分别进行扩增,最终通过对扩增产物的计数来定量原始样本中的DNA分子数量。 3. dPCR的步骤 3.1 样本准备 首先,需要从目标DNA样本中提取DNA,可以使用常见的DNA提取方法,如酚氯仿法或商用DNA提取试剂盒。 3.2 分割DNA 将提取得到的DNA样本均...
a. 高灵敏度:dPCR可以检测稀有或低拷贝数目标,比传统PCR技术更加敏感。 b. 高准确性:由于数字化的特性,dPCR消除了PCR扩增效率的影响,提供更加准确和可靠的定量结果。 c. 抗抑制性强:dPCR在复杂样本中的表现优秀,对样本中存在的抑制物质较为抗拒。 d. 可重复性好:数字化的dPCR技术具有出色的可重复性,可以在...
dPCR一般包括两部分内容,即PCR扩增和荧光定量分析。 一、PCR扩增 在进行PCR扩增前,需要将样品稀释至单分子水平,并平均分配到微小反应单元(几万个反应腔室)进行反应,可以使用微滴数字PCR芯片、微流控芯片或数字PCR芯片等分割技术。每个反应单元包含零个或一个目标分子。 由于对原样品的大幅度的稀释,使得PCR抑制剂浓...
在科研领域,dPCR 里的泊松分布原理可是大有用处。在基因检测方面,它可以精确测量基因的拷贝数。比如说,某些癌症的发生和特定基因的拷贝数变化有关。通过 dPCR 和泊松分布,医生就能准确知道患者体内这个基因的拷贝数,从而更好地诊断病情,制定治疗方案。 在病毒载量检测上,dPCR 泊松分布原理也发挥着重要作用。比如检测...
数字PCR（dPCR）是一种近几年发展起来的核酸定量分析技术。相比传统荧光定量PCR，dPCR不依赖扩增曲线循环Ct值和扩增效率，能直接读出DNA分子个数，实现绝对定量。其基本原理是将样本分成几十到几万个微滴，每个微滴包含一个或多个核酸分子，进行扩增后统计荧光信号，计算出DNA分子数目。dPCR在1990年代就...
dPCR的发展历史原理及其应用 搞要 摘要:数字PCR(DigitalPCR,dPCR)是核酸绝对定量癿新方法,该 技术通过分液,将含有核酸模板癿PCR反应体系分配到上万个反应器中迚 行PCR扩增,根据荧光信号癿有戒无,迚行结果计数,通过泊松分布癿统 计处理,直接得出核酸癿拷贝数。相比于实时荧光定量PCR ...
数字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一种核酸分子绝对定量技术。数字PCR能够直接数出DNA分子的个数,是对起始样品的绝对定量。如图为数字PCR技术的原理示意图,有关叙述错误的是( ) A. dPCR反应体系需要加入一定的缓冲溶液和Mg2+ B. dPCR是基于DNA单分子PCR方法进行计数的核酸定量 C. 每个反应单位有无荧光取决于是...
PCR又称多聚酶链式反应,其原理根据DNA在高温下(如95℃)变性,双链解开为两条单链;降低反应温度,使两条引物在低温下(37℃)分别与两条模板互补退火,形成局部双链;之后,在中温条件下合成DNA子链。 PCR的反应过程:包括高温变性、低温退火和中温延伸3个阶段。 (1)高温变性:离心管中,加入适量的缓冲液,微量的模板...