rna dot-blot 紫外交联原理 RNA dot-blot(RNA斑点杂交)中的紫外交联原理主要涉及利用紫外线的能量使核酸分子与固相支持物(如尼龙膜)之间形成共价键,从而实现核酸的固定,以下是具体解释: 核酸的光吸收特性:核酸分子(包括RNA)中的碱基具有共轭双键结构,这使得它们在紫外线波段(尤其是254 - 260nm)有较强的吸收能力...
💡想要制作出漂亮的dotblot吗?诀窍就在于快速交联!💨我通常会提前准备好稀释液并煮沸,然后迅速放入八连管中。紧接着,在交联仪旁,我拿起排枪就开始点样了。💉记住,水渍未干时就要去交联哦!💦而且,点样体积不宜过大,我这次只用了1ul,浓度在800-3000之间。📏将样品点在隔开尼龙膜的黄色胶纸上,效果更佳。
将杂交膜封入杂交袋中(每两组的膜背靠背封在一个杂交袋中),做好剪角标记(勿过大)。用1000μL加样器,加入预杂交液(Dig Easy Hyb),每组5mL全部加完,使尼龙膜恰恰漂起即可,若5mL预杂交液不足,可适当补加。除去气泡,置42℃恒温摇床上,轻轻振摇30min- 60min. 5. 杂交液制备:用预杂交液将探针按100ng/mL...
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NC膜 或 带正电荷的尼龙膜(建议使用尼龙膜,专门用来做核酸交联,效果比NC膜好) 干净的塑料盒或者培养皿 烘箱或者带有254nm灯泡的交联设备(可用紫外线消毒灯代替,1m范围内有效) 显影设备 三,流程 1,取出待测RNA样本,解冻后测量RNA浓度,全程冰上操作。
带正电荷的尼龙膜 10 厘米塑料培养皿 SG Linker(带 254nM 灯泡)【254nm的紫外线消毒灯管替代】 显影系统 三、程序 1、从冰箱中取出 RNA 样本(等分),用手解冻 RNA 样本管,然后放回冰上。 2、使用无 RNase 管,用无 RNase 水连续稀释 RNA 样品。我们使用 2.5/0.25/0.025/0.0025 μg/μL 的最终浓度。我...
一、实验材料 1. RNA待测样本（建议先进行mRNA纯化）2. 无酶水 3. TBST（1×TBS， 0.1%Tween-20）4. 封闭液 5. 一抗 6. 二抗 7. ECL显影液 8. 亚甲蓝染色缓冲液（0.4M醋酸钠、0.4M醋酸中的0.2%亚甲蓝）二、实验设备 无酶EP管 加热设备 NC膜 或 带正电荷的尼龙膜（建议使用尼龙...
说实话 尼龙膜要好一些。。。高分子化合物
反向斑点杂交(reverse dot blot) 相关知识点: 试题来源: 解析 是将ASO探针固定在尼龙膜上,用扩增的DNA样品与膜上探针杂交。由于ASO探针长度有限(一般为15～20个碱基),为使探针序列不受固定过程的影响,当ASO合成后,用末端转移酶在其3'端加一上段多聚核苷酸(dT)尾(一般为400个左右),这种带尾的ASO点在膜上后,...