2. 制备dh5a感受态细胞步骤 步骤1:准备感受态细胞培养基 1.将dh5a感受态细胞培养基取出并放置在室温下静置,使其达到室温。 2.使用无菌技巧,打开培养基瓶盖并使用无菌移液器将适量培养基转移到培养皿中。 步骤2:感染dh5a感受态细胞 3.取出dh5a感受态细胞的平板培养基,并在培养箱中孵育过夜(一般为37℃,孵育时间可根据...
处于这样一种状态的细菌细胞,就称之为“感受态”细胞。 感受态细胞的制备和转化是分子生物学实验中频繁使用的重要操作,最早的大肠杆菌感受态细胞制备的方法是Cohen等人于1972年建立的,该方法的主要原理是细菌通过冰冷的CaCl2低渗溶液处理后,加入待转化质粒DNA,经42 ℃短时间热冲击,细菌细胞可增加对该质粒DNA的摄入,该...
甘油-聚乙二醇法(Glycerin-PEG,G-PEG)属于高效感受态细胞制备方法,利用化学试剂在低温下与细菌质膜的相互作用,增加膜表面通透性,降低外源基因进入细胞内部难度,在一定条件下使外源DNA进入受体细胞。G-PEG法比CaCl2法更容易在0℃低温下保存感受态细胞,相较于CaCl2法,G-PEG法存储液中多了甘油、葡萄糖保护剂,-30 ℃以下...
1、原理 感受态是指受体细胞易接受外源DNA片段并实现其转化的一种生理状态。感受态由受体细胞的遗传性状所决定的，受菌龄、外界环境因子的影响。cAMP可提高感受态水平一万倍，而Ca2+存在也可大大促进转化的作用。新鲜，幼嫩的细胞是选择做感受态细胞的佳材料。带有外源DNA 的重组质粒，在体外构建后，导入宿主细胞，随着...
在做制备感受态细胞DH5a时,将含有pET-GFP的基因转化给了DH5a,转化后的DH5a确实能够在含Kan的平板上生长但是在进一步做PCR验证时(扩增目的基因),却又发现在相应大小750bp处没有条带,只有引物二聚体,这是为什么?应该可以排除PCR设定条件的问题,因为跟我同组的人都P出来了,就我没有目的条带. 相关知识点: 试题来...
百度试题 题目简述CaCl2法制备大肠杆菌DH5a感受态细胞的实验方法步骤?相关知识点: 试题来源: 解析 参考答案: 1. 将大肠杆菌DH5a接种于20ml LB液体培养基,37℃振荡(220rpm左右)过夜(12h左右)培养(至对数生长期); 反馈 收藏
大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 【实验目的】 掌握用CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞的原理和方法。 【实验原理】 常态细胞不能摄入外部溶液中的DNA分子,所以要转化质粒DNA进入大肠杆菌,首先必须制备感受态大肠杆菌细胞。 受体细胞经一定方法处理后,细胞膜的通透性发生变化,成为能够允许外源DNA载体分子通过的感受态细胞。 【...
DH5a制备化学感受态细胞应该不是太麻烦,一般用CaCl2的方法,就是注意其中几点:1.所用试剂必须是最高级别的,包括水,最好是Milli-pore级别的。2.所用器皿,枪..
这是最基本的，每个实验室方法大同小异，多做做，会做好的
大家好！我是第一次制备DH5a感受态，为了克隆测序使用。因为我们实验室之前没有人做过，所以在制备过程中...