感受态细胞的制备和转化是分子生物学实验中频繁使用的重要操作,最早的大肠杆菌感受态细胞制备的方法是Cohen等人于1972年建立的,该方法的主要原理是细菌通过冰冷的CaCl2低渗溶液处理后,加入待转化质粒DNA,经42 ℃短时间热冲击,细菌细胞可增加对该质粒DNA的摄入,该法已成为目前实验室制备感受态细胞的常规实验方法。 图1 C...
在1970年两位生物学家Morton Mandel和 Akiko Higa发现大肠杆菌细胞经CaCI2溶液处理时能够吸收入噬菌体DNA,细胞这种能够吸收DNA的状态便被称感受态。使用理化方法诱导细胞,改变细胞膜状态,增强细胞膜的通透性,细胞膜表面性状发生暂时性改变,方便外源基因或者载体进入受体细胞,这种处于最适合摄取和容纳外来 DNA状态的细胞被称...
（1）为制备转化效率较高的感受态细胞，可将保种液用于制作感受态细胞。（2）注意挑取LB固体培养基上湿润，圆滑的克隆，以防挑取杂菌。（3）进行二次培养的时候，摇床转速应选择较低转速，空载转速在100-150 rpm/min左右。（4）制作感受态的过程中尽量冰上操作，操作的动作尽量轻柔，稳健；试验中所用的试剂，转子...
大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 【实验目的】 掌握用CaCl2法制备大肠杆菌感受态细胞的原理和方法。 【实验原理】 常态细胞不能摄入外部溶液中的DNA分子,所以要转化质粒DNA进入大肠杆菌,首先必须制备感受态大肠杆菌细胞。 受体细胞经一定方法处理后,细胞膜的通透性发生变化,成为能够允许外源DNA载体分子通过的感受态细胞。 【...
百度试题 题目简述CaCl2法制备大肠杆菌DH5a感受态细胞的实验方法步骤?相关知识点: 试题来源: 解析 参考答案: 1. 将大肠杆菌DH5a接种于20ml LB液体培养基,37℃振荡(220rpm左右)过夜(12h左右)培养(至对数生长期); 反馈 收藏
感受态细胞的制备和转化是分子生物学实验中频繁使用的重要操作,最早的大肠杆菌感受态细胞制备的方法是Cohen等人于1972年建立的,该方法的主要原理是细菌通过冰冷的CaCl2低渗溶液处理后,加入待转化质粒DNA,经42 ℃短时间热冲击,细菌细胞可增加对该质粒DNA的摄入,该法已成为目前实验室制备感受态细胞的常规实验方法。