用于常规克隆的 DH5α 感受态细胞 DH5α 是最常用的实验室大肠杆菌菌株之一,可用于小质粒的增殖,具有高转化效率。通常情况下,该菌株通过氯化钙 (CaCl2) 方法进行转化;特殊设计的菌株衍生物 (如 DH5α-E) 可以使用电穿孔进行转化。 Subcloning Efficiency™ DH5α 感受态细...
感受态细胞是指细胞内外环境对于细胞表达和功能的影响敏感,能够快速、高效地接受和表达外源基因。在基因转化和克隆实验中,使用感受态细胞如DH5α能够大大提高基因转化的效率,从而获得更多的目标克隆。此外,感受态细胞还可以用于高通量筛选等研究,提高实验的效率和准确性。 在分子生物学研究中,选择适合的细胞株对于实验结果...
DH5a感受态细胞是一种经过特殊处理的大肠杆菌细胞,用于基因克隆实验中的DNA转化。DH5a是大肠杆菌的一个菌株,具有一系列经过筛选和修饰的遗传特性,使其更适用于基因克隆和表达。虽然DH5a感受态细胞在某些特性上与一般的大肠杆菌有所不同,例如它们能够吸收外源DNA并整合到自身基因组中,但它们的遗传基础和基本生物学特性仍然...
1. 🧊从-70°C取出感受态细胞后,立即放入冰浴中10分钟,确保完全解冻(细胞变得透明)。 🧼质粒与感受态细胞的比例应保持在1:10以下,以获得最佳转化效率。 🔥在42°C水浴中热激45秒,然后迅速转移到冰浴中,以避免过度加热。 🌀在离心管中加入LB培养液后,充分摇匀以确保细胞均匀分布。 🌱在摇床上复苏1至1...
在生物化学实验中,关于DH5α感受态细胞的转化步骤,通常包括以下几个关键环节: 准备材料: DH5α感受态细胞(需保存在冰上)。 连接产物或质粒DNA(确保DNA浓度和纯度适中)。 无菌离心管、移液器及枪头等实验器材。 冰浴感受态细胞: 从冰箱中取出DH5α感受态细胞,立即置于冰上解冻。 解冻后,轻轻摇匀感受态细胞,避免剧...
5、37℃振荡培养1h(200rpm),400rpm离心2min,弃掉一部分培养基,剩余培养基重悬,吸取适量体积均匀涂布到含有相应抗生素培养基的LB固体培养基平板中,37℃正置至液体吸收,后倒置培养过夜; 注意事项: 感受态细胞不可多次冻融和放置时间过长,会降低感受态细胞的转化效率; 所有操作无菌条件下进行;发布...
感受态细胞的制备和转化是分子生物学实验中频繁使用的重要操作,最早的大肠杆菌感受态细胞制备的方法是Cohen等人于1972年建立的,该方法的主要原理是细菌通过冰冷的CaCl2低渗溶液处理后,加入待转化质粒DNA,经42 ℃短时间热冲击,细菌细胞可增加对该质粒DNA的摄入,该法已成为目前实验室制备感受态细胞的常规实验方法。
大肠杆菌经Ca离子处理后可摄取外源DNA(Plasmid、Phage DNA),处于这种状态的细胞称作感受态细胞。在进行基因重组时,使用感受态细胞的转化实验应用十分广泛。制作基因文库、重组质粒体以及进行亚克隆实验时,特别是目的基因含量十分低的情况下时,使用高效的感受态细胞十分重要。使用pUC57质粒检测该DH5a感受态细胞,转化效率可达...
Top10感受态 (E. coli) 和 DH5α感受态细胞是常用的大肠杆菌细胞系，用于基因克隆、高效表达和蛋白质产量增加等研究。虽然它们都是常用的实验室细胞系，但它们在一些关键方面存在区别。下面是对它们的优缺点进行详细对比描述说明：优点比较：1. 转化效率高：Top10 具有非常高的转化效率，适用于高效转化难以处理的 ...
DH5α是大肠杆菌(Escherichia coli)的一种感受态细胞系，通常被用于分子生物学实验中。这些细胞被设计成对外源DNA接受性较高，因此在分子克隆、DNA转化和质粒扩增等实验中被广泛使用。DH5α感受态细胞对于吸收外源DNA特别有效，这使得它们在基因工程和分子生物学研究中成为常见的实验室工具。中文名称：DH5a感受态细胞 英文...