一、准备实验材料 1. dcfh-da荧光探针:这是一种常用的荧光探针,用于检测活性氧(ROS)的水平。实验前需要保证荧光探针的纯度和稳定性。 2. 细胞培养基:用于培养细胞,保证细胞的健康状况。 3. 细胞样本:需要提前培养好的细胞样本,确保细胞的密度和活性满足实验要求。 4. 无菌离心管、移液枪等实验用具:用于实验操作...
DCFH-DA检测法常用于检测细胞或组织中的过氧化氢(H2O2)、羟自由基(•OH)、超氧阴离子(O2•-)等活性氧物种。 DCFH-DA检测法的步骤如下: 1.细胞准备:将需要检测活性氧的细胞培养在合适的培养基中,保证细胞的活力和完整性。 2.DCFH-DA处理:将培养的细胞离心,去除培养基,并用含有适当浓度的DCFH-DA的PBS...
· 对于刺激时间较短的细胞,先进行探针装载,再用活性氧阳性对照物(Rosup)或目标药物刺激细胞。 · 对于刺激时间较长的细胞,先用活性氧阳性对照物(Rosup)或目标药物刺激细胞,再进行探针装载。 工作液配制: ·将DCFH-DA工作液以1:1000或1:500的比例稀释于无血清细胞培养基或缓冲液(例如PBS)中,使其终浓度为10...
DCFH-DA 的使用步骤: 1.盘子或板上的种子细胞,并在固定在37o的孵化器中孵化 C用95%的空气和5%CO2平衡。 2.丢弃培养基,并用HBS洗涤两次细胞。 3.向单元格添加适当的工作溶液。 4.在步骤1中将细胞孵育30分钟。 5.丢弃工作溶液并用HBS洗涤两次。 6.在适当的时间内添加含有ROS诱导剂的培养基并在步骤1中孵育。
利用荧光探针DCFH-DA进行活性氧检测是一种基于荧光强度变化,定量检测细胞内活性氧水平 的最常用方法,DCFH-DA 本身没有荧光,可以自由穿过细胞膜,进入细胞内后,被细胞内的酯酶水 解生成 DCFH,而 DCFH 不能通透细胞膜,从而使探针易于装载至细胞内,细胞内的活性氧可以氧化 无荧光的 DCFH 生成有荧光的 DCF,在最大激...
DCF的荧光强度与活性氧物种的浓度成正比,因此可以通过测量DCF的荧光强度来间接测量活性氧物种的生成。 操作步骤: 1.将DCFH-DA溶解在适当的有机溶剂(如二甲基亚砜、乙酸乙酯等)中制备为一定浓度的工作溶液。 2.将细胞或组织样品均匀洒在培养皿或载玻片上。 3.向细胞或组织样品中加入适量的DCFH-DA工作溶液,使其...
DCFH-DA分子量 DCFH-DA活性氧检测原理和步骤 活性氧荧光探针(DCFH-DA),H2DCFDA,ROS荧光探针 2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯,2,7-Dichlorodihydrofluorescein diacetate,4091-99-0 DCFH-DA使用说明书: 本品以粉末形式提供,可直接溶于无水DMSO配制成1-10mM储存液,常用工作浓度1-10μM,需根据自身的实验体系或参...
DCFH-DA活性氧检测原理: 细胞摄取后,DCFH-DA被细胞酯酶脱乙酰化为非荧光化合物,随后被ROS氧化为 2'-7'二氯荧光素 (DCF)。 DCF是一种荧光化合物,可通过荧光计、流式细胞仪或荧光显微镜检测,其最大激发光谱和发射光谱分别为495 nm和529 nm。 DCFH-DA激发波长: ...
DCFH-DA探针在细胞内的作用机制(图片来源于网络) 05实验流程 (1)装载探针 1、先用无血清培养基稀释阳性对照(Rosup,100mM)到常用工作浓度100μM,对于刺激时间较短的细胞,先装载探针,后用活性氧阳性对照(Rosup)或自己感兴趣的药物刺激细胞。 2、对于刺激时间较长的细胞,先用活性氧阳性对照(Rosup)或自己感兴趣...