图6 On-target indel errors (800-kp knock-in). Deep sequencing was used to measure the levels of indel formation when using dCas9–SSAP and Cas9 references at the endogenous targets DYNLT1 (left) and HSP90AA1 (right). HDR templates with a 200-bp HA were used as the donor template. 为...
总体而言，dCas9-SSAP 基因编辑工具能够在不引入DNA双链断裂的前提下进行高效、安全、精准的长片段外源DNA的插入，从而第一次揭示了无切割基因编辑工具的可行性和应用潜力。图1：dCas9-SSAP 工作原理 图2：与经典CRISPR基因编辑需要对DNA进行切割会产生随机突变，而dCas9-SSAP则不需要切割DNA可实现精确编辑 原文链接...
dCas9蛋白不能切割DNA,但保留了解开靶位点并形成R环的能力,使非靶链被认为可用于SSAP刺激的同源重组。为了测试这一点,作者设计并评估了三种主要的微生物SSAP:λ噬菌体Bet、大肠杆菌Rac原噬菌体RecT和噬菌体T7 gp2.5。作者通过RNA适体MS2将SSAP募集到化脓性链球菌Cas9的失活版本-dSpCas9(以下简化为dCas9)中(图2)...
图6 On-target indel errors (800-kp knock-in). Deep sequencing was used to measure the levels of indel formation when using dCas9–SSAP and Cas9 references at the endogenous targets DYNLT1 (left) and HSP90AA1 (right). HDR templates with a 200-bp HA were used as the donor template. Det...
实验数据显示,这一全新的dCas9-SSAP编辑工具可在近10个基因位点进行上千碱基的定点插入,最高实现了20%的编辑效率,与传统Cas9基因编辑工具相当。值得注意的是,dCas9-SSAP介导的基因编辑实现接近零的脱靶率,同时精确插入率普遍高于99%。同...
实验数据显示,这一全新的dCas9-SSAP编辑工具可在近10个基因位点进行上千碱基的定点插入,最高实现了20%的编辑效率,与传统Cas9基因编辑工具相当。值得注意的是,dCas9-SSAP介导的基因编辑实现接近零的脱靶率,同时精确插入率普遍高于99%。同时,在包括人类胚胎干细胞系在内的多种人类细胞中,这一编辑工具都有效。