用RT PCR从CVB3 感染细胞中扩增出VP1 片段,重组入真核表达质粒pcDNA3 中,转化大肠杆菌C600,扩增后的质粒经CsCl 密度梯度离心纯化,体外转染COS 7 细胞,用SDS PAGE和Western blotting 检测表达产物;并经胫骨前肌注射小鼠,每鼠100μg/ 次,隔4 周加强一次,共3 次.免疫后不同时间检测抗体,淋巴细胞增殖反应等免疫...
werenotfoundinpcDNA32VP1immunizedmice,butdidexistincontrolmice.CONCLUSION:Intramuscularimmu2nizationwithpcDNA32VP1maybeapromisingapproachagainstCVB3infection.Keywords:CVB3;VP1;DNAvaccine;immunoprotection摘要目的:构建表达柯萨奇病毒B3(CVB3)主要包膜蛋白VP1的基因疫苗,并研究该疫苗诱导CVB3特异性免疫应答及免疫保护的...
系统标签: 病毒 蛋白 免疫 重组 vpl 联合 中文摘要CVB3VPl蛋白与重组腺病毒及重组质粒联合应用的免疫效果摘要目的:柯萨奇病毒B组3型(CoxsackievirusgroupBtype3CVB3)感染所致的病毒性心肌炎严重危害人类健康,也是新生儿猝死的重要原因,迄今尚无有效的预防方法。VPl是CVB3的主要衣壳蛋白,可诱导机体产生免疫应答。研究表明,...
故本研究引入长度为10、15、19个由G和S组成的Linker来构建表达MDC与CVB3VP1融合蛋白核酸疫苗。 方法:(1)用PCR方法分别扩增出带Linker的MDC-L15(用于构建Linker长度为15个氨基酸的融合蛋白)、MDC-L19(用于构建Linker长度为19个氨基酸的融合蛋白)、L15-VP1(用于构建Linker长度为15个氨基酸的融合蛋白)和L19-VP1(用于...
CVB3-VP1基因与IL-15双表达质粒的构建
目的: 构建表达柯萨奇病毒B3(CVB3)主要包膜蛋白VP1的基因疫苗, 并研究该疫苗诱导CVB3特异性免疫应答及免疫保护的作用.方法: 抽提CVB3 RNA, 以RT-PCR扩增VP1基因, 克隆于真核表达载体pcDNA3中, 构建质粒pcDNA3-VP1.将该质粒转染Hela细胞, 观察其表达情况; 以50 μg pcDNA3-VP1质粒DNA肌注免疫BALB/c小鼠3次, ...
结果:通过intein环化载体我们可以使VP1蛋白的环化效率达到100%,将纯化得到的VP1环肽疫苗通过肌肉注射免疫小鼠。结果显示,VP1环肽疫苗在诱生CVB3特异性血清IgG的水平,CVB3特异性淋巴细胞增殖、杀伤以及IFN-γ+T细胞免疫应答方面都显著高于VP1线性多肽疫苗,表明VP1环肽疫苗可以引起较强的体液和细胞免疫应答。以诱导心肌炎剂量...
Linker长度对MDC和CVB3VP1融合基因疫苗免疫效果的影响 据资料显示10-22个氨基酸效果较好。故本研究引入长度为10、15、19个由G和S组成的Linker来构建表达MDC与CVB3VP1融合蛋白核酸疫苗。 方法:(1)用PCR方法分别扩增出... 韩小艳 - 《河北医科大学》 被引量: 2发表: 2007年 IL—15基因真核表达质粒的构建及其对...
1 材料和方法1.1 材料 真核表达质粒 pcDNA3/sVP1-C3d3、 CVB3VP1基因重组腺病毒 Ad/VP1和空腺病毒 Ad为本室前期构建, 大肠杆菌 DH5α、 HeLa细胞、 Sp2/0细胞、 柯萨奇病毒 B3型 Nancy株为本室保存, 腺病毒穿梭载体 pAdTrack-CMV、 骨架载体pAdEasy-1及 Bj5183菌株为河北医科大学解剖学教研室米立国教授...