一、CutTag实验原理 1.什么是CutTag实验? CutTag实验是一种用于检测DNA剪切修饰和构象的高通量DNA测序方法。它能够对染色质上的特定剪切位置进行测序,从而揭示DNA剪切修饰和组织特异性建构。 2. CutTag实验的工作原理是什么? CutTag实验的基本流程包括如下几个步骤: 1) DNA剪切:将待研究的染色质样本进行化学或酶...
cuttag和dap实验原理 CUT&Tag技术原理:在Tn5上融合了protein A/G抗体结合功能域的转座体pAG-Tn5。在进行CUT&Tag实验时,首先进行靶蛋白特异性抗体(一抗)孵育,使抗体进入细胞与靶蛋白结合。为了放大信号,接着进行二抗孵育。最后孵育pAG-Tn5转座体,使得转座体进入细胞并与抗体结合,这样就把转座体间接的固定在靶蛋白...
上面的流程图可以看出,CUT&Tag与ATAC-seq的区别就在于,CUT&Tag用了抗体,Tn5转座酶进一步改造可以识别抗体。 因此CUT&Tag实验需要做阴性对照(IgG),CUT&Tag文库和ATCA文库差别就在于抗体识别的蛋白,如果抗体的特异性很差,比如在所有组蛋白上都有结合,那这个时候建库得到的就是ATCA文库而不是CUT&Tag文库。这个时候阴性...
CUT-Tag实验原理
CUT&Tag实验作为ChIP-seq的替代技术,因其背景低、耗时短、结果好、兼容性强被科研人口口相传。虽然CUT&Tag实验整体看起来不太复杂,但是整个实验设计以及试剂组成都比较精妙。小翌希望大家在熟练操作CUT&Tag实验的同时,还能掌握整个实验原理包括试剂原理。
CUT&Tag全称Cleavage Under Target & Tagmentation,翻译为靶向剪切及转座酶技术,是一种研究蛋白-DNA互作的技术,替代传统的ChIP-seq方法。开头介绍ATAC-seq和CUT&Tag非常相似,原因就在于CUT&Tag也用Tn5转座酶,只不过这个酶是Protein A/G融合的Tn5转座酶。当然,两者研究内容还是不一样的,下面详细说一下。