同时，研究中会通过选择CUT&Tag和RNA-seq结果中的一些代表性位点，设计特异性引物进行实时定量PCR验证，确认目标蛋白是否确实与这些位点结合，并且影响基因表达。以及，研究过程中，还可以通过基因敲除、过表达或RNA干扰等手段，改变目标蛋白的表达水平，观察下游基因表达和细胞表型的变化，间接验证结合位点的功能，确认其在...
作者比较了CUT&Tag与ChIP的实验流程,发现CUT&Tag实验操作过程中不需要进行实验材料的交联和DNA超声处理,通过Tn5将结合蛋白的染色质片段破碎后,片段就已经与接头整合,可以直接进行PCR富集和NGS,总之CUT&Tag在操作简便性和所需的实验时间方面优于ChIP。 图3 CUT&Tag生物学重复显示出高重复性和高信噪比 (Tao et al....
目前,CUT&Tag正在做春季大促:买六送一,有相关需求的老师欢迎咨询驻地销售或联系助理小爱。 CUT&Tag产品介绍 CUT&Tag是研究蛋白和DNA互作的新兴实验方法,该方法是通过蛋白特异性抗体引导Protein A-Tn5酶在目标蛋白结合的DNA位置进行切割并且在序列两端加上测序接头,经过PCR扩增后形成可以用于高通量测序的文库,随后对文...
同时,研究中会通过选择CUT&Tag和RNA-seq结果中的一些代表性位点,设计特异性引物进行实时定量PCR验证,确认目标蛋白是否确实与这些位点结合,并且影响基因表达。以及,研究过程中,还可以通过基因敲除、过表达或RNA干扰等手段,改变目标蛋白的表达水平,观察下游基因表达和细胞表型的变化,间接验证结合位点的功能,确认其在特定生物...
CUT&Tag技术是一种新兴的DNA-蛋白质互作研究方法,有望取代传统的ChIP-seq技术,探索组蛋白修饰区域、转录因子结合状态以及全基因组范围内DNA-蛋白质互作情况。其以操作简单(无需免疫共沉淀和超声破碎)、细胞起始量低(低至60个细胞)、...
在基于二代短读段测序平台的CUT&Tag相关技术研究中,Tn5转座酶需要分别在具有染色质修饰(组蛋白修饰或转录因子结合)的基因组DNA的两侧进行转座,从而在短DNA片段(通常为200bp-500bp)的两端连接上测序接头,且只有双端带有不同测序接头的短D...
Cell Signaling Technology (CST)正在扩大包含 CUT&Tag 在内的染色质分析产品组合。您可以灵活选择订购完整的 CUT&Tag 检测试剂盒或只订购您所需的试剂。 1CUT&Tag 实验流程--简化 DNA 文库制备 CUT&Tag 省去了体外接头连接步骤,从而节省您的宝贵时间并可以直接进行文库的 PCR 扩增。让您从细胞到 DNA 文库的实...
图2 CUT&Tag与ChIP的实验流程 (Tao et al., 2020)。作者比较了CUT&Tag与ChIP的实验流程,发现CUT&Tag实验操作过程中不需要进行实验材料的交联和DNA超声处理,通过Tn5将结合蛋白的染色质片段破碎后,片段就已经与接头整合,可以直接进行PCR富集和NGS,总之CUT&Tag在操作简便性和所需的实验时间方面优于ChIP。
图2 CUT&Tag与ChIP的实验流程 (Tao et al., 2020)。作者比较了CUT&Tag与ChIP的实验流程,发现CUT&Tag实验操作过程中不需要进行实验材料的交联和DNA超声处理,通过Tn5将结合蛋白的染色质片段破碎后,片段就已经与接头整合,可以直接进行PCR富集和NGS,总之CUT&Tag在操作简便性和所需的实验时间方面优于ChIP。
7. 液滴内PCR:液滴回收及液滴内PCR反应; 8. 破乳及产物分选:油包水产物破乳回收DNA片段; 9. 文库构建及产物纯化。 3.影响实验结果的重要因素 影响高质量的单细胞CUT&Tag的结果,通常包括几个重要的因素: 首先,良好的细胞(核)质量是成功的一半,应选择新鲜的细胞和组织进行细胞核制备,对于细胞样品要求生长状态...