CUT&RUN qPCR实验操作演示(HD101) 09:05 ELISA 实验注意事项 02:41 A112 TUNEL细胞凋亡检测(细胞爬片样本)实验操作演示 05:09 Western Blot(蛋白质印迹法,WB)实验操作演示 10:42 A112 TUNEL细胞凋亡检测(石蜡切片样本)实验操作演示 05:05 CUT & Tag 实验注意事项 03:06 CUT&Tag实验操作演示(TD903...
http://www.vazyme.com/product/279.htmlCUT&Tag技术是一种研究蛋白质-DNA互作的新方法,通过将Protein G或Protein A与经过工程学改造的超高活性Tn5转座酶融合,形成兼具双重活性的新型融合酶(Hyperactive pG-Tn5/pA-Tn5 Transposase),在抗体引导下精准靶向切割目的蛋白附
CUT&Tag技术的核心是使用Protein A/G-Tn5转座体复合物(pA/G-Tn5),在抗体引导下,pA/G-Tn5直接结合目的蛋白并切割目的蛋白附近的DNA序列,切割后的DNA片段直接用于建库测序。 二、操作流程 1.细胞收集:收集适量的细胞,通常为10^5-10^7个细胞。 2.抗体孵育:将细胞与特异性抗体在冰上孵育一段时间,使抗体与目的...
选择商业化的CUT&Tag已验证过的抗体,同时需要优化抗体和细胞的孵育比例;然后,对于核心转座酶需考虑其活性、兼容性、效率、稳定性等方面进行实验端优化;最后,对文库质量进行严格控制,理想的文库质检图应显示核小体分布趋势,通常是集中在约200bp、400bp和600bp的峰。
CUT&Tag技术的实验步骤如下:首先,准备好细胞样本,并进行适当的处理。然后,将抗体与目标蛋白结合,形成复合物。接下来,加入pA-Tn5转座体,使其与抗体复合物结合。之后,激活转座酶,实现对目标区域的切割和标记。随后,进行DNA提取和纯化。最后,通过PCR扩增和测序分析,获得相关数据。在实验过程中,需注意控制反应条件,如温...
CUT&Tag实验步骤 对于CST CUT&Tag实验,首先将细胞与刀豆蛋白A包被的磁珠混合。洋地黄皂苷的透化处理可以让靶标特异性的一抗进入细胞并结合目的蛋白。由于需要将信号放大,因此还要添加二抗。随后进行预装接头的高活性CUT&Tag pAG-Tn5 (Loaded) (#79561)融合转座酶的孵育,转座酶进入细胞后可以通过pAG结构域与二抗结合...
1.5mL 管 600g 5min, washing buffer 洗两次 600g 5min。 一抗孵育 二抗孵育1:100稀释 置于磁力架上,2min, 弃上清 pA/G-Tnp转座了孵育 1:500稀释,混合 均匀,1h dna片段化,37度孵育60min DNA提取, 。。。开盖凉干,但磁珠不反光,20卫生 PCR。
ConA磁珠激活,该步骤需要15min。磁珠的储存条件为4℃,为了确保磁珠的性能,在使用前应提前把磁珠取出放置室温平衡。通过使用Binding buffer活化磁珠,来提高磁珠结合细胞核的能力。如果有多个CUT&Tag样本处理,为了确保反应的一致性和准确性,建议首先在单个1.5-2 mL离心管中批量处理所有反应需要的ConA磁珠,之后再将磁珠分装...
解析CUT&Tag湿实验操作技巧 首先我们根据具体实验设计,准备相应的样品和靶点抗体(冻存K562细胞(100万);H3K4me3 /c-myc靶点),选择ABclonal整套试剂盒(RK20265 CUT&Tag Assay Kit(pAG-Tn5)for illumina, RK20290 Dual DNA Adapter 96 Kit for One-step DNA Lib Prep),按照相应操作说明书进行相关实验操作,整体操作...
4、消化时间大大缩短:CUT&Tag3.0试剂盒中片段化之后的消化时间缩短至10min,相较于之前版本的1h或者过夜消化时间大大缩短,且实验结果与先前的一致。 5、洗涤Buffer减量:CUT&Tag3.0试剂盒中洗涤Buffer的用量大大减少,防止操作过程中因洗涤体积过大而实验员又把控不好造成样本损失。减量的Buffer不会影响实验结果。