CRISPR RNA(crRNA)是CRISPR基因编辑系统中的关键组成部分,负责引导Cas蛋白精准识别并切割特定的DNA或RNA序列。其
crRNA是CRISPR RNA的简写，tracrRNA是trans-activating crRNA的简写。crRNA以前体pre-crRNA的形式被转录，tr...
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在细胞内，crRNA和tracrRNA通常是分开转录的，然后通过碱基配对相互作用形成双链结构。为了构建sgRNA，研究...
研究人员选择了一个常用的crRNA进行工程化，通过在crRNA的3′或5′端增加不同的尿嘧啶（U）数量或通过化学修饰来提高Cas13a的转切割活性。实验结果显示，5′端3U延长的crRNA显著增强了LbuCas13a的反式切割活性，而3′端3U的延长则降低了活性；用PS-2′-OMe分别对两端延长3U的crRNA进行化学修饰，Cas13a的稳定性有...
融合crRNA与tracrRNA形成sgRNA，简化CRISPR-Cas系统，提高效率与稳定性。通过化学合成、体外转录或体内表达，利用DNA模板包含crRNA、tracrRNA与连接子序列，转录成pre sgRNA，经Cas9蛋白加工成成熟sgRNA。sgRNA连接子形成发夹结构，连接crRNA与tracrRNA。以切割特定DNA序列为例，设计DNA模板包含crRNA、连接子与...
crRNA和tracrRNA通过设计DNA模板并经过转录和加工融合成一条sgRNA。具体过程如下：DNA模板设计：科学家们首先设计一个DNA模板，该模板包含了crRNA的序列、tracrRNA的序列以及一个连接子序列。这个连接子序列起到了桥梁的作用，使得crRNA和tracrRNA能够无缝对接。转录产生pre sgRNA：当DNA模板被转录时，会产生一个...
在设计crRNA时,遵循几个重要的原则可以提高Cas13的效率和特异性。 首先,crRNA应该具有足够的特异性,以准确地引导Cas13到目标序列上。为了实现这一点,我们可以使用一些基因组学和生物信息学工具来预测并筛选出高特异性的crRNA序列。例如,对目标序列进行BLAST分析,可以识别出与目标序列高度相似的序列,从而排除它们。此外...
研究还发现,AcrVIB1能抑制Cas13b对crRNA的剪切加工能力,降低并改变Cas13b-crRNA复合物对目标RNA的结合特性,最终干扰Cas13b的RNA切割活性。随后的机制研究指出,AcrVIB1主要通过干扰Cas13b对crRNA的保护能力,最终加速RNA酶对crRNA的降解。 ...
crRNA是由CRISPR序列转录而来的一条短RNA,它包含了目标DNA序列的信息,可以和目标DNA序列的互补序列形成碱基配对。tracrRNA是一条较长的RNA,它包含了一个和Cas蛋白结合的结构域,和一个和crRNA的重复区域互补的序列。 为了简化CRISPR-Cas系统,科学家们将crRNA和tracRNA融合成一条单链RNA,叫做sgRNA(小导向RNA)。sgRNA...