ssODN:通过合成特定的单链寡核苷酸(ssODN),可以精确地引导CRISPR系统进行点突变或tag敲入。 HDR:同源重组修复(HDR)模板的设计,允许你在目标DNA上引入特定的突变或插入。 MMEJ:微同源修复(MMEJ)模板,通过短同源臂(~500-1000bp)来实现修复。🔧 实验步骤: SgRNA设计:选择合适的SgRNA,确保其能够精准切割目标DNA。 HDR...
实现病毒复制无损前提下对乙肝病毒基因组的改造,使得病毒基因组DNA含有一个拷贝的CRISPR-Tag;在特定sgRNA (small guide RNA) 的引导下,可高效招募数十个融合绿色荧光蛋白的dCas9(dCas9-GFP),实现对含有CRISPR-Tag序列的cccDNA进行单拷贝精度...
基于CRISPR-Cas9的活细胞DNA成像技术在最近几年得到了很大的发展,但是大部分工作还是局限于标记带重复序列的DNA片段。不含重复序列的基因标记还是存在很大的挑战。 通过制作新的活细胞DNA标签,简称CRISPR-Tag。该标签的DNA序列来自线虫的基因组,在线虫体内能被Cas9高效切割。这些DNA序列不存在人类基因组里,但整合到人的基...
实现病毒复制无损前提下对乙肝病毒基因组的改造,使得病毒基因组DNA含有一个拷贝的CRISPR-Tag;在特定sgRNA (small guide RNA) 的引导下,可高效招募数十个融合绿色荧光蛋白的dCas9(dCas9-GFP),实现对含有CRISPR-Tag序列的cccDNA进行单拷贝精度的细胞内示踪。
The lack of efficient tools to image non-repetitive genes in living cells has limited our ability to explore the functional impact of the spatiotemporal dynamics of such genes. Here, we addressed this issue by developing a CRISPR-Tag system using one to
Tag-seq showed that all the potential off-target sites of the tested sgRNAs can be parallelly profiled by a single transfection (Figs.3and4, and Supplementary Figs.5and6), indicating that Tag-seq is a convenient platform for assessment the specificity of CRISPR/Cas nucleases in a scalable ...
Methods for identifying and nominating on- and off-target CRISPR editing sites, particularly Cas9, with improved accuracy and sensitivity in which a tag is inserted a double-stranded breaks and the region comprising the tag and a universal adapter comprising a unique molecular index (UMI). The ...
中国科学院遗传与发育生物学研究所高彩霞研究组与王道文研究组合作,利用CRISPR/Cas9技术获得了缺少TaGW2基因一个拷贝(B1或D1)、两个拷贝(B1和D1)以及三个拷贝(A1, B1和D1)的突变体,通过分析这些突变体,揭示了TaGW2-B1及-D1对小麦粒重以及蛋白品质性状的控制作用。
CRISPR-Cas9作为可编程的基因组编辑工具,目前已经得到了广泛应用。CRISPR-Cas9介导的DNA编辑最初被认为会导致随机插入和缺失,然而近来研究表明,Cas9诱导DNA断裂的修复不是随机的,而与目标位点的序列环境密切相关。 为了探索背后的具体机制,作者开发了BreakTag方法,用于分析Cas9导致的DNA双链断裂(DSBs),并识别Cas9切口的决...
BreakTag技术揭示DNA断裂特征 自从CRISPR-Cas9技术问世以来,它已经彻底改变了基因编辑领域。然而,尽管CRISPR-Cas9以其编程性和高效性著称,但在精确的基因编辑应用中仍面临挑战。特别是Cas9引发的DNA双链断裂(DSB)在修复过程中常常出现随机的插入和缺失(indels),这导致了编辑结果的不确定性。为了提升基因编辑的精度,科学...