CRISPR-Cas9系统是当下基因编辑的主流技术,在基础研究和临床转化领域具有广泛的应用前景。这其中SpCas9核酸酶最早被应用于真核生物的基因编辑研究,也是CRISPR-Cas系统中的“顶流”【1,2】。考虑到SpCas9的PAM序列局限性及在细胞内易聚集且...
一般来说,基因特异的gRNA模板序列为位于PAM序列的前20nt。常用spCas9蛋白识别的PAM序列特征为NGG(其中N为任意核苷酸)。因此,gRNA模板序列选择非常方便,即使没有软件,我们也可根据序列自行设计。针对于gRNA序列的设计有很多网站可以参考,通过网站评分综合选择就好。这里小恒推荐两个较权威的网站: ①http://crispr-era....
sgRNA的长度:S. pyogenes II型CRISPR系统(SpCas 9)一般为20nt。 2 sgRNA序列的碱基组成:基因特异的sgRNA 模板序列为位于PAM 序列前,PAM序列的特征为NGG (N可以为任意核苷酸),所以选择3'末端含有GG的sgRNA,这样可以构成PAM序列。同时,sgRNA的序列应避免以4个以上的T结...
Magigen CRISPR-Cas9蛋白spCas9是一种 RNA 介导的核酸内切酶,可以催化双链 DNA 的特异位点切割。其识别 PAM(Protospacer Adjacent Motif)序列的 NGG 处,在靶序列的 3 个碱基内进行切割。PAM 序列的 NGG 必须连在基因编辑靶标位点之后,位于与 sgRNA 互补的 DNA 的对链上。
CRISPR/Cas9实验实操专题一：sgRNA设计 CRISPR/Cas9实验流程 1.sgRNA设计 1.1设计原则 1） II型CRISPR系统（SpCas 9）的sgRNA 靶点一般为20nt 2）sgRNA序列的碱基组成：基因特异的sgRNA 模板序列位于PAM 序列前，PAM序列的特征为NGG (N可以为任意核苷酸)3）sgRNA的序列应避免以4个以上的T结尾，GC%含量为30%-70...
AAV 载体系统：含 AAV 反向末端重复序列（ITR）、Cas9 基因，用于体内递送（需辅助质粒 pAAV-RC、pAAV Helper）。2. Cas9 蛋白与 RNP 复合物重组 Cas9 蛋白：如 SpCas9-NLS（核定位信号修饰），与 sgRNA 体外组装成 RNP，瞬时转染细胞以降低脱靶风险（避免质粒整合）。蛋白酶抑制剂：如 PMSF，在蛋白纯化过程...
当我们锁定PAM序列(示例为针对spCas9的gRNA oligo设计)之后,只需取NGG前面20nt的序列,并设计如图所示的oligo,合成即可(新手小白们要注意合成方向哦)。 图3. BsmBI接头的oligo序列示例 4. 构建Cas9和gRNA表达载体 将合成的oligo进行退火,然后将其连接至经过酶切线性化的载体上(图4)。对于转染效率高的细胞,通常用...
本产品主要用于CRISPR/spCas9系统体外酶切实验、CRISPR靶点筛选等实验。可以在体外切割PCR产物、质粒等双链DNA。 试剂盒中提供了Cas9体外酶切所需试剂,包括spCas9蛋白,反应缓冲液,以及对照sgRNA和底物DNA。使用该试剂盒可以快速开展Cas9体外酶切实验。产品特点:...
CRISPR-Cas 系统介导的基因编辑系统自问世以来带给学术界和科学界极大的变革,甚至深刻地影响了人们对科学技术的认识。 然而,Cas蛋白的体积过大严重限制了其应用,SpCas9:1368氨基酸;SaCas9:1053氨基酸;Cas12a:1353氨基酸;Cas12b:1108氨基酸。...
Step3:选择对应的cas9类型,最常见的是spCAS9,其次为saCAS9,根据类型选择对应的即可。 信息填完整之后点击“submit”,出现结果页面: 结果界面显示:位置、序列、特异性评分、有效性、脱靶等众多参数;网站排序以特异性评分为基准排序,也就是排序靠前的为综合...