DNA-free体系定义: CRISPR-Cas9体系中不含任何DNA载体形式组分,可通过化学转染、显微注射或电转进行编辑 全RNA体系:sgRNA+Cas9 mRNA; crRNA: tracrRNA+Cas9 mRNA RNP体系:sgRNA+Cas9 蛋白; crRNA: tracrRNA+Cas9 蛋白 DNA-free体系优势: 编辑效率更高:特殊设计算法、Dharmacon专利2’-ACE化学修饰[1]保证更高的编辑...
We offer Dharmacon Edit-R CRISPR guide RNA in pools or as individual reagents in a variety of formats to fit many different experimental workflows. Synthetic single guide (sgRNA) or two part crRNA:tracrRNA reagents can be co-transfected with Cas9 mRNA or protein for DNA-free workflows. Lentiv...
CRISPR guide RNA(gRNA) 转录试剂盒(目录号/Cat.: SG-RNA-001)应运而生。 CRISPR guide RNA(gRNA) 转录试剂盒内含T7 RNA Polymerase Mix,可以从少量样本得到高效转录,合成gRNA(适用于Cas12a、Cas13a、Cas12b和Cas9等的gRNA制备)。0.5μg对照模板单次反应可获得产量高达百微克左右的gRNA。 首先是模板准备: 1 ...
CRISPR基因编辑依赖于其两种组分,向导RNA(guide RNA,gRNA)负责识别和靶向目标位点,Cas酶负责对目标位点的切割。CRISPR-Cas9是应用最为广泛的CRISPR系统,但越来越多研究显示,其对DNA的直接切割具有潜在风险。 近年来,越来越多的CRISPR-Cas家族被相继发现,其中CRISPR-Cas13是新型CRISPR工具中的耀眼新星(尤其是Cas13d)。
在天然微生物中,guide RNA是由CRISPR RNA(crRNA)和反义激活crRNA(trans-activating crRNA,tracrRNA)碱基互补配对形成的双RNA杂交结构。crRNA的5’端包含20-nt spacer序列,以碱基互补配对特异性识别DNA。当DNA片段包含与spacer序列互补片段以及相邻PAM,该位点就能被CRISPR-Cas9效应复合物特异性识别并切割。在实际应用中,...
Dharmacon Edit-R CRISPR系列guide RNA是经验证的算法设计的,可实现高特异性的功能基因敲除,因此您可以对敲除结果充满信心。 适应多种工作流程的灵活性 A. DNA-free体系:合成sgRNA或crRNA: tracrRNA,搭配Cas9蛋白或mRNA B. Lentiviral sgRNA:慢病毒质粒载体形式,更适合无法化转/电转的难转染细胞 ...
在CRISPR-Cas9 系统中,Cas9 核酸内切酶需要与一段长度约为 100 核苷酸的 Guide RNA(gRNA)的形成复合物,并在 gRNA 与目标序列结合的引导才能进行基因编辑。 要高效、准确地使用「魔剪」进行基因编辑,最首要的任务就是设计一个出色的 gRNA。 图片来源:Nature Methods ...
在天然状态下,引导Cas9切割的guide RNA是由crRNA和tracrRNA组成,而sgRNA是将这两个RNA通过一段接头连成了一个RNA(single guide RNA),同样具有活性功能5。sgRNA可分为3个部分:第一个部分是20 nt左右的序列与靶标DNA互补配对;第二个部分是repeat-antirepeat序列,这段序列本身是tracrRNA互补结合crRNA的部分,同时一部分...
经过进一步研究发现其实将互补形成结构的crRNA-tracrRNA复合体末端相接，形成一个sgRNA（single guide RNA，单链向导RNA），也并不影响Cas9活性，反而还大大增加了使用的便捷性。张锋和Osamu Nureki研究了Cas9的蛋白结构，整个Cas9蛋白多达1368 aa，大致分为4个功能结构域，分别是RUVC和HNH（核酸酶结构域），PI（PAM结合...
1、用且只用“双剑合璧装”guide RNA (gRNA)图15 2、鉴定体系用的是GFP rescue,更漂亮图16 3、做且只做 human cells 更多关注在人细胞中(包括iPS cell)的实际应用。 4、做了庞大规模的生信设计,目标针对整个基因组水平设计全几组靶标,覆盖近一半基因。(野心很大...