CRISPR/Cas9系统是利用一段与靶序列互补的gRNA引导cas9核酸酶对特异靶向的DNA进行识别和切割,造成双链DNA断裂,然后细胞会利用自身具备的两种DNA修复机制对断裂的DNA进行修复,即非同源末端连接(Non-homologous end joining, NHEJ)或同源介导的修复(Homology-directed repair, HDR),而基因敲除则利用的是NHEJ的修复方式,在...
dcas9对基因的内源表达调控主要是利用了cas9 DNA结合域和具有切割酶活性的结构域在结构和功能上的相对独立的特征,将可以调节基因转录的转录调控因子或表观修饰基因作为效应子与dcas9蛋白融合,利用sgRNA引导dcas9-effector共同作用于靶基因启动子部分,调控基因表达。这些效应子有的作为转录因子调控基因的表达调控,有的作为...
LentiPool CRISPR 文库无需高通量基础设施即可进行 CRISPR-Cas9 筛选。这些高质量的混合慢病毒文库涵盖与我们的 LentiArray 文库相同的基因靶点,以即用型高滴度(>1 × 108TU/mL)慢病毒颗粒的形式提供,用于影响更高的基因敲除筛选。 LentiPool CRISPR 文库包括为每个靶向基因编码多达四个 g...
dcas9对基因的内源表达调控主要是利用了cas9 DNA结合域和具有切割酶活性的结构域在结构和功能上的相对独立的特征,将可以调节基因转录的转录调控因子或表观修饰基因作为效应子与dcas9蛋白融合,利用sgRNA引导dcas9-effector共同作用于靶基因启动子部分,调控基因表达。这些效应子有的作为转录因子调控基因的表达调控,有的作为...
1、dCas9-VP64 VP64是单纯疱疹病毒16(VP16)的四聚体,可在转录水平激活基因表达。Gilbert等人(Gilbert Luke A et al.,2013)将dCas9与VP64融合蛋白,有效地激活了Gal4UAS-GFP的表达。此外,在特异靶向NTF3和VEGFA的单个或多个sgRNA的引导下,dCas9-VP64显著增加了基因的表达,表明该融合蛋白可以特异性地激活内...
图 1.CRISPR/Cas-GFP载体的示意图。图 2.在现有的大多数CRISPR应用中，gRNA和Cas9都是表达自两个不同的载体。当转换为单一载体形式后，针对人KRAS基因座的gRNA设计显示出了在人K562细胞中保留对插入缺失高水平的诱导。单质粒GFP的形式可确保所有所需的CRISPR/Cas成分（如Cas9和gRNA编码序列）都能有效地递送至GFP...
在特异性标记HUDEP细胞系中内源性HBG1基因的初步尝试中，研究人员在HUDEP1细胞中评估了CRISPR-Cas9介导的基因标记可行性。通过共转染含有eGFP报告基因的双链DNA模板和Cas9_gRNA #2质粒，尝试基因编辑，但流式细胞术检测显示敲入效率较低（GFP阳性细胞不足1%）。利用FACS富集了正确编辑的细胞，并经DNA序列分析确认了...
为了利用CRISPR/Cas9方法在红色毛癣菌中进行基因敲除,我们使用两种不同的质粒pCas9GFP(表达eGFP标记的Cas9核酸酶,Cas9GFP)和psgRNA5.0(表达基因特异性sgRNAs)来靶向pacC基因(Figure1)。本文设计了四种不同的sgRNA:与pacC外显子1互补的sgRNA-1和sgR...
2020年诺贝尔化学奖授予法国科学家艾曼纽尔·卡彭蒂耶(Emmanuelle Charpenticr)和美国科学家詹妮弗·杜德纳(Jcnnifer A. Doudna),以表彰她们发现基因技术中最大的利器之一CRISPR-Cas9基因剪刀(Crispr-cas9 gene scissors)。CRISPR-Cas9基因剪刀的发现使得原本繁琐复杂的细胞基因编辑工作能在几周甚至更短的时间内完成,推动...
此外,研究者还对Cas9蛋白进行适当的修饰(加上信号肽,或标签蛋白),以提高基因组编辑效率。目前为止,该系统已经对拟南芥、水稻等进行基因组编辑,并获得了稳定的突变植株:并在烟草、大豆、甜橙、小麦、高梁、玉米以及地钱等多种植物的原生质体或叶片等瞬时表达系统中进行了基因组编辑,通过表达GFP等报告基因,验证了CRISPR...