CRISPR-Cas9基因敲入系统(knock in) 实验原理: CRISPR-Cas9基因敲入系统是Cas9内切酶切割双链DNA,且有一段高度同源的DNA修复模板存在的情况下,生物体内启动HDR修复路径,将一段外源DNA定点插入基因内部。 同源性定向修复(HDR)途径,对比NHEJ修复途径,同源性定向修复(HDR)途径是更为精确的修复机制。这种修复机制主要用于CR...
1.CRISPR-Cas9结构 2.CRISPR/Cas系统 3.CRISPR-Cas9原理 1. 外源DNA的捕获 2. crRNA的形成 3.对外源基因组的干扰 4.修复DSB 5.在真核细胞中使用CRISPR系统 6.CRISPR/Cas9的脱靶 7.常见应用 1、基因敲除(Knock-out) 2、基因敲入(Knock-in) 3、基因抑制、基因激活(Repression or Activation) 4、多重编辑...
CRISPR/Cas9不仅能敲除基因,而且还能敲入基因(knock in)。它先利用Cas9蛋白在目的基因特定位置切割,然后以含待敲入序列的donor质粒为模板,通过同源修复(HDR)方式,引入点突变或者外源基因。常见的敲入基因如:在基因的N端或者C端插入GFP/Flag/Luciferase等序列监测内源基因的定位、表达和示踪,或者结合Cre-LoxP系统引入序列...
CRISPR/Cas9 knock in基因敲入技术 面议 ChIP-seq ￥1 ATAC-seq 面议 产品介绍 技术简介 CRISPR/Cas9 是一种由 gRNA 引导的 Cas9 核酸酶对目标基因进行靶向编辑的技术。gRNA识别并结合在目标基因区域,引导 Cas9 蛋白对结合位点进行切割,产生 DNA 双链断裂(DSB),此时若导入外源供体 DNA,即可通过同源重组(HR)...
A53815 TrueTag™ Knockout Enrichment Donor DNA Kit Each 5,593.01 飞享价 截止至: 2025/12/31 6,535.00 Save 941.99 (14%) CRISPR 有关产品 TrueCut Cas9 蛋白家族 TrueGuide 合成 gRNA CRISPR 基因敲入编辑和基因标记的资源和支持 应用指南:对基因进行 GFP 标记并富集编辑细胞的快速方法下载应...
另一项研究则由早年利用CRISPR技术成功构建基因敲除食蟹猴的季维智院士团队合作完成,他们基于之前利用CRISPR-Cas9在大鼠上进行精确基因编辑的技术进一步拓展到食蟹猴中,成功获得了Oct4最后一个密码子后定点整合GFP的食蟹猴,并检测到少许的错配以及脱靶现象。这项研究证明了灵长类动物可成功进行精确基因编辑的可行性,为灵...
Cas9GFP1-10GFP11Homology-directed repairSplit GFPThe protocol in this chapter describes a method to label endogenous proteins using a self-complementing split green fluorescent protein (split GFPdoi:10.1007/978-1-0716-2667-2_8Ryo.TamuraDepartment of Cellular Biology, University of Georgia, Athens, ...
使用CRISPR/Cas9和荧光富集产生三重敲除CHO细胞系 先前已经证明,CRISPR / Cas9基因编辑技术是用于CHO细胞基因破坏的有效工具。稳定的细胞系在这项研究中,研究人员通过在CHO细胞的多个环境被同时破坏FUT8,BAK和BAX,进一步证明了CRISPR/Cas9基因组编辑的适用性和效率。为了从转染的细胞库中分离出表达Cas9的细胞,GFP通过2A...
So far, CRISPR-Cas9 system has two main applications: Gene knock-out and Gene knock-in. For gene knockout, once DNA double strand breaks are induced, the cells will repair the break through NHEJ DNA repair pathway which will cause...
利用Cas9-poly(A),他们采用了两种方法来完成相对较长的DNA片段,如GFP序列的靶向基因敲入。第一种方法利用长ssODNs (lsODNs)作为靶向供体。第二种方法涉及共同注射两个gRNAs作为“剪刀”切割基因组DNA和供体质粒DNA中的靶位点,两个短ssODNs作为“浆糊”连接切割位点的末端。