http://www.flyrnai.org/crispr/,Drosophila 7、http://cas9.cbi.pku.edu.cn/index.jsp8、http:/...
以HPRT基因中的12个位点为靶点,分别使用Alt-R™ crRNA:tracrRNA、Alt-R™ crRNA XT:tracrRNA、Alt-R™ sgRNA,与Alt-R™ Cas9核酸酶组装成3种RNP,加入2μM Alt-R™ Cas9电穿孔Enhancer,转染HEK-293细胞,培养48小时后,通过二代测序检测总的实验效率,结果显示其具有很好的稳定性。 2、化学修饰RNA,增加...
一、寻找目的基因的靶标 使用在线设计网站 CRISPR direct,如需直接复制网址,可在生物学霸后台对话框回复direct即可。 靶点挑选要点: 基因敲除靶点应设计在起始密码子附近(包括起始密码子)或者起始密码子下游的外显子范围内。 不同Cas9/gRNA 靶点在基因敲除效率上有较大差异,因此同时设计构建 2～3 个靶点的基因敲除载...
目前,CRISPR/Cas9基因编辑技术在疾病基础研究、靶点验证、药物分子的高通量筛选、以及遗传性疾病的治疗等领域得到了越来越广泛的应用。sgRNA在CRISPR/Cas9基因编辑系统中具有准确识别靶基因序列的作用,其效果可影响编辑的效率、是否发生脱靶等,甚至对最终基因编辑的效果产生决定性作用。因此,设计合理有效的sgRNA是我们实现基...
以常用的张锋实验室CRISPOR设计网站为例,点击“CRISPOR”, 填入待设计的外显子序列、选择对应的物种、Cas9类型,设计靶点。(其他设计工具,如Benchling设计流程请点击查看。https://zhuanlan.zhihu.com/p/555063579) 网址:https://zlab.bio/guide-design-resources ...
1.1 登陆http://www.rgenome.net/cas-offinder/网站,输入靶点序列,自动预测易脱靶位点。 1.2 本次参数:SpCas9 from Streptococcus pyogenes: 5'-NGG-3';Sus scrofa (susScr11) - Pig;Mismatch Number 4;DNA Bulge Size 2;RNA Bulge Size 2。
打开张锋CRISPOR设计网站,点击“CRISPOR”,进入信息填写页面: Step1:添入待设计靶点的序列; Step2:选择对应物种,可搜索如mouse;若出现多个选项,可默认选择带有年份及年份较新的子数据库; Step3:选择对应的cas9类型,最常见的是spCAS9,其次为saCAS9,根据类...
目前,CRISPR/Cas9基因编辑技术在疾病基础研究、靶点验证、药物分子的高通量筛选、以及遗传性疾病的治疗等领域得到了越来越广泛的应用。sgRNA在CRISPR/Cas9基因编辑系统中具有准确识别靶基因序列的作用,其效果可影响编辑的效率、是否发生脱靶等,甚至对最终基因编辑的效果产生决定性作用。因此,设计合理有效的sgRNA是我们实现基...
⚫可反复编辑多个基因 ⚫表达单靶点 产品内容：pFN-Cas9-K2质粒(50ng/μl) 20μl pFG-sgRNA线性化质粒(50ng/μl) 25μl SL Enzyme Mix 25μl 5×SL Buffer 50μl SCV Primer Mix1 200μl SCV Primer Mix2 200μl SCV Primer Mix3 200μl 诱导剂1 2ml 诱导剂2 250μl 1/ 28 ...
PBJ：通过CRISPR/Cas9精准调控微藻运动能力相关基因｜基因编辑 Nature：植物生长素PIN家族蛋白结构｜AI设计 PBJ ：利用柑橘愈伤组织和烟草叶片高效合成抗癌明星药物藏红花素｜植物合成 CSBJ：碱基编辑靶点设计工具BEtarget｜基因编辑 科｜技｜突｜破 Scientific Reports:蓝藻-根际菌联合体促进番茄幼苗成长｜微生物 根际细菌...