他们利用CRISPR/Cas9技术成功构建出了CFTR敲除MLO-Y4细胞系。对CFTR基因敲除细胞系进行抑制剂处理后,检测胞内Cl-浓度和膜电位,发现CFTR基因敲除细胞系胞内Cl-浓度和膜电位的增加更大,证实了CFTR介导骨细胞中的Cl-外排。此外,通过比较CFTR敲除前后MLO-Y4细胞碱化后胞内pH恢复速率发现,CFTR能促进细胞分泌HCO3-,...
他们利用CRISPR/Cas9技术成功构建出了CFTR敲除MLO-Y4细胞系。对CFTR基因敲除细胞系进行抑制剂处理后,检测胞内Cl-浓度和膜电位,发现CFTR基因敲除细胞系胞内Cl-浓度和膜电位的增加更大,证实了CFTR介导骨细胞中的Cl-外排。此外,通过比较CFTR敲除前后MLO-Y4细胞碱化后胞内pH恢复速率发现,CFTR能促进细胞分泌HCO3-,提示C...
CRISPR/Cas9系统的工作原理是 crRNA通过碱基配对与 tracrRNA结合形成 tracrRNA/crRNA 复合物,此复合物引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 crRNA 配对的序列靶位点剪切双链 DNA。而通过人工设计 crRNA 和 tracrRNA 这两种 RNA,改造成具有引导作用的sgRNA ,从而引导 Cas9 对 DNA 的定点切割。随后不久,MIT的华人生物学家张锋证明...
他们利用CRISPR/Cas9技术成功构建出了CFTR敲除MLO-Y4细胞系。对CFTR基因敲除细胞系进行抑制剂处理后,检测胞内Cl-浓度和膜电位,发现CFTR基因敲除细胞系胞内Cl-浓度和膜电位的增加更大,证实了CFTR介导骨细胞中的Cl-外排。此外,通过比较CFTR敲除前后MLO-Y4细胞碱化后胞内pH恢复速率发现,CFTR能促进细胞分泌HCO3-,提示C...
我们可以利用CRISPR/Cas9技术直接在目标细胞系上敲除或敲入离子通道,进行细胞层面实验。特别是一些需要长时程检测离子通道活性的实验,离子通道敲除细胞系更能成为比较理想的实验材料。若采用动物模型,我们需要对离体组织进行离子通道的活性检测,即使将生命力较为顽强的脑组织放入维持液中,其理想的检测窗口也只能延长到4...
我们可以利用CRISPR/Cas9技术直接在目标细胞系上敲除或敲入离子通道,进行细胞层面实验。特别是一些需要长时程检测离子通道活性的实验,离子通道敲除细胞系更能成为比较理想的实验材料。若采用动物模型,我们需要对离体组织进行离子通道的活性检测,即使将生命力较为顽强的脑组织放入维持液中,其理想的检测窗口也只能延长到4...
北京泽平代理的dCas9蛋白稳转细胞系(dCas9稳转细胞株),将dCas9蛋白基因转染入各类常用细胞系,通过筛选单克隆,可以得到稳定表达dCas9蛋白的细胞系。实验时,仅需转染gRNA/sgRNA,进而高效实现基因沉默,令CRISPRi操作大大简化,而无需面对核糖核蛋白复合体RNP大分子转染效率低的问题。
首先在体外将gRNA和Cas9蛋白混合成为gRNA和Cas9的复合效应物,然后通过瞬时转染技术(脂质体或电转等)将复合效应物递送到细胞内,进而实现对靶基因的编辑。 此外,也有通过慢病毒对细胞进行Cas9基因的稳转(将编码Cas9蛋白的基因片段整合到宿主细胞的基因组中),通过筛选后得到能够...
同志们,要想玩转CRISPR/Cas9系统,你首先得有Cas9蛋白的表达载体,然后你得有Cas9的稳转细胞株。有了这种细胞,你只需要设计gRNA就可以做基因操作了,是不是很牛X,令人流口水?你们应该流口水,因为酸菜现在要给大家提供这种珍贵的细胞株。 在哺乳动物细胞中,要使CRISPR/Cas9系统工作就需要将Cas9和gRNA质粒共转染进入细胞...
研究人员通过在INS-1 胰腺β细胞系中,利用CRISPR/Cas9技术分别靶向GIP 受体 (GIPR) 和 GLP-1 受体 (GLP1R) ,成功获得GIPR-KO和GLP1R-KO克隆。并将获得的细胞系用于测试不同双激动剂的活性。双激动剂A在野生型INS-1细胞和GIPR-KO细胞中检测到相当的效力,但在GLP1R-KO细胞中效力低了20倍,表明GLP-1在双...