Cas9-Cell line Gene Mutation service(CGM)基因点突变细胞系是细胞基因研究方法中非常有用的一个手段,可以在细胞内原位对点突变的功能进行研究。在细胞系上实现高效的转染是实现基因点突变的前提;提高效率要解决问题是:Cas9切割位点与“点突变”位点之间距离导致点“点突变”效率大幅下降的问题,还有“点突变”载体的...
利用CRISPR/Cas9技术构建定点突变小鼠品系 CRISPR/Cas9 技术原理 CRISPR/Cas9 系统源于细菌的适应性免疫防御机制。其中,Cas9 是一种核酸内切酶,在整个基因编辑过程中起着 “分子剪刀” 的关键作用。而引导 RNA(…
Cas9是一种酶,能够在RNA的指导下识别并切割特定的DNA序列。 2.工作原理: 通过设计与目标DNA序列互补的小导向RNA(sgRNA),Cas9蛋白被引导到特定的DNA位置。 Cas9蛋白在sgRNA识别的位置切割DNA双链,导致DNA断裂。 细胞利用自身的DNA修复机制来修复这种断裂。在修复过程中,可以引入或修正特定的突变。 操作步骤 1.设计sg...
CRISPR/Cas9 技术作为一种基因编辑工具,能够在基因组中实现定点基因突变,为基因功能研究和基因治疗等领域变化。 CRISPR/Cas9 系统主要由 Cas9 蛋白和引导 RNA(gRNA)组成。gRNA 可以通过碱基互补配对原则识别特定的基因组序列,引导 Cas9 蛋白到目标位置。Cas9 蛋白具有核酸内切酶活性,能够在特定位置切割 DNA 双链,造成 ...
CRISPR/Cas9助力攻克癌症肿瘤“大魔王”——KRAS KRAS基因是人体内的一个正常基因,但其突变常发生在各种类型的肿瘤中,大约有30%的癌症患者基因组中都存在KRAS基因突变,其中包括90%的胰腺癌,50%的结肠癌和25%的肺癌。 Figure1: KRAS突变在不同类型癌症中的突变比例,数据来源于AACR GENIE 9.0公共数据库[1] ...
对于由单基因缺陷引起的遗传病，如囊性纤维化、镰状细胞贫血等，CRISPR - Cas9系统有望成为一种有效的治疗手段。以镰状细胞贫血为例，其病因是β - 珠蛋白基因中的一个点突变。科学家可以利用CRISPR - Cas9系统结合合适的同源模板，通过HDR修复途径将突变的基因纠正为正常基因，从而治愈疾病。复杂疾病的治疗潜力 在...
目前CRISPR/Cas9 Gene Knock in系统可用于目的基因引入点突变,从而模拟人类遗传疾病模型;或者将报告基因(如EGFP,mCherry,BFP等)通过同源重组的方式引入目的基因的特定位点,从而可以通过报告基因的表达跟踪目标基因的表达;亦或将功能缺失的DNA片段修复为有功能的DNA片段,即可实现基因治疗的目的。此系统的应用范围不胜枚举...
一、dCas9调控基因转录原理 Cas9蛋白具有独立结合DNA和切割DNA的结构域,对DNA的切割主要依赖于HNH和RuvC结构域,这两个结构域相互独立,分别去切割DNA的两条链,将HNH和RuvC的切割位点突变后既不影响蛋白质整体结构,同时又可以使其失去对DNA的切割能力,突变后的cas9蛋白可以在sgRNA的引导下结合到DNA上,但不对DNA起切割...