Cas9-Cell line Gene Mutation service(CGM)基因点突变细胞系是细胞基因研究方法中非常有用的一个手段,可以在细胞内原位对点突变的功能进行研究。在细胞系上实现高效的转染是实现基因点突变的前提;提高效率要解决问题是:Cas9切割位点与“点突变”位点之间距离导致点“点突变”效率大幅下降的问题,还有“点突变”载体的...
目前CRISPR/Cas9 Gene Knock in系统可用于目的基因引入点突变,从而模拟人类遗传疾病模型;或者将报告基因(如EGFP,mCherry,BFP等)通过同源重组的方式引入目的基因的特定位点,从而可以通过报告基因的表达跟踪目标基因的表达;亦或将功能缺失的DNA片段修复为有功能的DNA片段,即可实现基因治疗的目的。此系统的应用范围不胜...
基因点突变细胞系服务 让临床发现的点突变更快构建成为研究的细胞模型,点突变细胞模型构建快至7周 基因定点敲入细胞系服务 ClonePlus™细胞株可以高效快速实现目的片段的敲入,实现蛋白融合、蛋白标记、目的基因的编辑 微生物基因编辑服务 Cas9-Microbe Service主要探索在微生物基因编辑方面的技术方法并为客户提供高效稳定...
而后,为验证共突变是否会影响G12C特异性抑制剂的效用,Vaclova等人使用CRISPR/Cas9技术在NSCLC细胞系中引入c.35G>T突变,构建出KRASG12C-G12V双突变及KRASG12F点突变NCI-H358细胞,并研究这两种细胞对G12C特异性抑制剂的敏感性。结果显示,相比于KRAS G12C细胞系,上述两种存在共突变情况的细胞对G12C特异性抑制剂...
本文介绍了CRISPR/Cas9的工作原理,sgRAN设计以及sgRNA表达质粒的构建,还有构建好的CRISPR/Cas9系统如何在细胞中工作和后续如何筛选编辑成功的永久细胞系。 CRISPR 全称 clustered regularly interspaced short palindromic repeats(成簇的规律间隔的短回文序列),该系统功能结构由三部分构成,crRNA,tracrRNA和Cas9(Crispr associate...
近期,又有中国学者通过CRISPR/Cas9 技术成功构建了酪氨酸酶(TYR) 等位基因突变的猪胎儿成纤维细胞系和PARK2和PINK1双基因knock-out的细胞系,成功培养出基因突变的个体,并可稳定遗传给下一代。韩秋影等利用CRISPR/Cas9技术实现了细胞水平的基因敲除技术,同时构建了能稳定表达Cas9蛋白的HEK293细胞,并运用CRISPR/Cas9基因...
将蛋白与无核酸酶的 Cas9( Cas9 nuclease-null)融合,并表达适当的 sgRNA ,可靶定任何 dsDNA 序列,而 sgRNA 的末端可连接到目标DNA,不影响 Cas9 的结合,是继ZFN、ES 细胞打靶和 TALEN 等技术后可用于定点构建基因点突变大、小鼠动物的第四种方法,...
Cas9可以对靶基因组进行剪切,形成DNA的双链断裂。在通常情况下,细胞会采用高效的非同源末端连接方式(NHEJ)对断裂的DNA进行修复。在修复过程中通常会发生碱基插入或缺失的错配现象,造成移码突变,(移码突变:是指DNA分子由于某位点碱基的缺失或插入,引起阅读框架变化,造成下游的一系列密码改变,使原来编码某种肽链的基因变...
在该修复路径中,需要将一段与预期编辑位点上下游紧邻序列具有高度同源性的DNA修复模板、特异的gRNA和Cas9核酸酶一起引入细胞中。在高度同源性DNA模板存在的情况下, HDR机制可以通过同源重组将一段DNA精准地插入特定的基因组位点。 目前CRISPR/Cas9 Gene Knock in系统可用于目的基因引入点突变,从而模拟人类遗传疾病模型;...
一、利用Cas9 质粒建立knock-out 细胞系实验的详细过程 1.1 确定待敲除基因的靶位点 1.2 设计识别靶位点的识别的一对DNA Oligo(引物) 1.3 构建表达sgRNA的质粒 1.4 sgRNA活性检测 1.5 利用Cas9 质粒建立knock-out 细胞系 1.1、确定待敲除基因的靶位点