当将CRISPR - Cas9系统导入人体进行基因治疗时，人体免疫系统可能会对Cas9蛋白产生免疫反应。由于Cas9蛋白来自细菌，人体免疫系统可能将其识别为外来病原体，从而引发免疫排斥，影响基因编辑的效果，甚至可能对患者造成严重的不良反应。2. 应对免疫反应的措施 为了解决免疫反应问题，一方面可以对Cas9蛋白进行改造，降低其免疫...
但是这两名专家很快转而研究依赖一种被称为Cas9的蛋白质的CRISPR系统,因为这个CRISPR系统比其他CRISPR系统更简单。 遭遇噬菌体入侵时,CRISPR会作出反应,此时细菌把间隔区DNA和DNA回文序列转录成一串长的RNA分子。tracrRNA(一个额外的RNA片段)和Cas9一起作用产生crRNA(源自间隔区的RNAs)。Charpentier的团队于2011年将这...
CRISPR/Cas9可以用于改良作物和家畜的基因，提升作物产量、抗病性和环境适应性。例如，利用CRISPR技术增强作物的抗旱性或提高作物营养价值。7. 基因治疗：通过靶向修复突变基因，CRISPR/Cas9在治疗单基因遗传疾病方面展现了巨大的潜力。例如，研究人员正在探索利用CRISPR技术治疗囊性纤维化、镰状细胞贫血和杜氏肌营养不良症等...
使用CRISPR-Cas9 切割 DNA 后,双链断裂可以通过两种细胞自然修复机制之一进行修复(图 3)。 在不存在修复模板的情况下,非同源末端连接(NHEJ)过程会导致 gRNA 定义的断裂周围有不同插入或缺失(插入缺失)的异质细胞群。可利用该过程在特定序列周围生成有随机缺失的细胞系,从而获得功能性敲除。
CRISPR-Cas9基因编辑技术主要有两种应用方式: 1.基因敲除(Knockout):通过CRISPR-Cas9在目标基因上引入双链断裂(DSB),细胞通过非同源末端连接(NHEJ)修复机制修复断裂,过程中可能引入插入或缺失(indels)突变,导致目标基因功能丧失。 2.基因插入或替换(Knockin):利用同源重组(HDR)机制,在目标基因上引入特定的突变或外源序...
浙江大学刘祥瑞、平渊和周天华课题组合作在Science Advances杂志上发表文章,报道了外泌体递送CRISPR-Cas9 RNP用于肝脏靶向的疾病治疗研究成果。该研究开发了一种方法,可以将Cas9 RNP装载到肝星状细胞(HSCs; LX-2)的外泌体中,用于治疗不同的肝脏疾病。与使用原代细胞相比,使用免疫细胞系具有均匀性、可重复性和操作性...
报道称，这种基因组编辑技术为在几乎所有生物体中的大量应用操作打开了大门。自2012年这一编辑技术由沙尔庞捷和杜德纳开发以来，CRISPR/Cas9已用于寻找针对多种疾病(包括癌症和艾滋病等)的新疗法，以及培育植物新品种等。为什么说这是革命性成果？报道称，这项技术可随意改变生物基因组。CRISPR/Cas9将对未来的医学产生...
CRISPR慢病毒转染法是一种高效引入CRISPR基因编辑系统到目标细胞中的技术,旨在实现对基因的有针对性编辑或调控。 实验步骤: 1、质粒构建:构建好含有CRISPR-Cas9系统的质粒,其中包括lentiCRISPR-sgRNA。该质粒携带sgRNA序列,可指导Cas9蛋白准确识别并切割目标基因(之前已详细描述过)。
Cas9 蛋白质在 CRISPR 系统里属于特别关键的组成部分之一。这是一种由 RNA 引导的 DNA 切割酶，特异性和活性都很高。Cas9 蛋白质有两个关键的结构域：一个是 nuclease 域，另一个是 RNA 识别域。nuclease 域能把 DNA 链切断，RNA 识别域会跟引导 RNA（gRNA）产生相互作用，这样就能识别和定位特定的 DNA 序列...