7. 利用这一原理，可以通过检测collateral cleavage产生的小RNA来判断靶RNA是否存在，实现RNA的检测。这提供了高灵敏度和内切的RNA检测手段。cas13a切割RNA的主要应用如下:1. RNA检测 利用cas13a的RNA内切效应和信号放大能力，可以实现RNA的高灵敏度检测。只要设计与靶RNA互补的crRNA，就可以通过检测内切片段来判断靶...
1. CRISPR/Cas13a核酸免扩增可视化快速检测原理:高灵敏的CRISPR RNA(crRNA),与Cas13a结合为复合体,当复合体遇到含有靶单链RNA(ssRNA)的反应液时,复合体中crRNA通过碱基互补配对特异性结合靶ssRNA,并激活Cas13a核酸酶的反式切割活性,来切割...
当Cas13蛋白-crRNA二元复合体识别底物RNA后，Cas13蛋白被激活，除了特异性地切割底物RNA，还会非特异性地切割环境内的报告分子，释放信号。图3 SHERLOCK检测原理示意图，图片来源Kellner MJ al et, 2019 2、RNA成像：研究人员对Cas13蛋白HEPN结构域R-XXXX-H基序进行突变，得到dCas13蛋白。dCas13蛋白丧失切割酶活性...
CRISPR-Cas13a系统具有特异性识别并结合单链RNA序列从而非特异性切割RNA的特点,可应用于检测肿瘤外周血游离核酸,对早期肿瘤患者进行筛查。同时,Cas13a在进行体内RNA切割的过程中,不涉及编码基因DNA的改变,可直接对基因转录产物mRNA进行编辑,达到基因修饰的...
研究人员通过结构和功能证明,由crRNA和target RNA激活的Cas13a能切割任意单链的RNA。 图2. CRISPR Cas13a蛋白的切割原理图 相关阅读 什么是SHERLOCK技术? 用CRISPR Cas13a编辑RNA 基于CRISPR Cas13a的快速、简易核酸检测CREST CRISPR Cas13a结合恒温扩增技术进行病毒检测与实战验证 ...
CRISPR-Cas13a系统包含两部分:Cas13a蛋白与sgRNA。Cas13a蛋白属于CRISPR系统中的III类,是一种RNA酶,可以在RNA分子上产生双链断裂。sgRNA是一个短链导RNA,含有与靶RNA互补的20个核苷酸序列,可以引导Cas13a蛋白准确识别靶RNA。工作机制上,Cas13a蛋白与特定的sgRNA形成复合体,该复合体与细胞内的RNA分子相互作用,一旦发现...
一、SATCAS平台的工作原理 SATCAS(Simultaneous Amplification and Testing platform based on Cas13a)是一个由两条引物、逆转录酶、T7 RNA聚合酶、CRISPR-Cas13a及crRNA构成的级联酶促反应检测平台。在靶标RNA存在的情况下,T7启动子引物结合并引发逆转录生成RNA/DNA杂交双链,RNase H活性消化RNA链,留下含T7启动子...
LwCas13a是第一个被用于核酸检测中的Cas13a蛋白。Gootenberg等开发的基于Cas13a蛋白的检测技术与等温扩增技术结合,既可以检测DNA靶标,也可以检测RNA靶标。该技术被命名为SHERLOCK (Specific high sensitivity enzymatic reporter unlocking)。检测原理如图3-a,由于Cas13a识别RNA靶标,所以RPA扩增后需要将产物转录为RNA,后...
后来,Tian等(2020)开发了基于单分子RNA诊断的CRISPR/Cas13a检测系统,免除了逆转录酶和核酸延伸程序。他们指出,使用CRISPR/Cas13a检测系统可以很容易地检测到SARS-CoV-2。Cas13蛋白的这些优势,使研究人员能够在不同的生物体中靶向任何非靶向序列。 Cas13蛋白的优缺点。与Cas9和Cas12一样,CRISPR/Cas13也是一种强大、...