1)质粒:pSpCas9(BB)-2A-GFP (Addgene plasmid ID: 48138),用于转染cas9,该质粒含有Cas9与GFP,Cas9的nickase活性将用于特定目的基因的ko,GFP可做为转染标签。 pSpCas9(BB) (Addgene plasmid ID: 42230),若实验用sgRNA为PCR扩增纯化产物,则需要该质粒做为U6的模版。 pUC19(Invitrogen, cat.no.15364-011)可用...
CRISPR-Cas9基因敲除系统是Cas9内切酶切割双链DNA,生物体启动NHEJ修复途径,切割位点产生移码突变,导致基因沉默。首先在待敲除基因的上下游各设计一条向导RNA(向导RNA1,向导RNA2),将其与含有Cas9蛋白编码基因的质粒一同转入细胞中,向导RNA通过碱基互补配对可以靶向PAM附近的目标序列,Cas9蛋白会使该基因上下游的DNA双链断裂。
sgRNA，单链引导 RNA，作为 CRISPR/Cas9 系统中 cas 蛋白的引导序列，可参照 sgRNA 工具网站(http://...
最常用的 Cas9 识别的 PAM 序列是 5'-NGG-3'，其中 N 代表任意碱基，Cas12a 识别的常用 PAM 序列...
基因编辑CRISPER CAS9 基因编辑技术基因编辑技术 CRISPRCas 的研究进程 CRISPRCas 的结构分类及作用机制 CRISPRCas 在基因治疗中的应用 存在问题和展望基因编辑技术 RNA干扰:大片段双链RNA小分子干扰
CRISPR-Cas9首先在基因组的特定位置使得位点特异性双链断裂(DSB),然后通过非同源末端连接(NHEJ)或同源重组(HR)进而修复DSB,同时完成基因编辑。 CRISPR-Cas系统的来源: 作为原核生物的天然免疫系统之一,CRISPR/Cas存在于大多数细菌和古生菌中。原核生物被病毒入侵后,由于具备CRISPR/Cas系统,因此病毒DNA的一小段被提取...
CRISPER/Cas9基因编辑系统是由Cas9核酸酶与单链向导RNA(sgRNA)形成的稳定核糖核蛋白复合物,能识别和切割特定的核苷酸片段,该系统可用于基因的敲除、编辑
1基因编辑技术 基因编辑技术是通过人为操作引起特定基因的插入、缺失或替换等，对基因组进行精确修饰和定向编辑的一种技术。▷①Cre-LoxP重组酶系统：Cre重组酶是一种具有催化活性的单体蛋白,它与限制酶功能相似，能识别特异的DNA序列，即loxP位点，使loxP位点间的基因序列被删除或重组。1基因编辑技术 ▷②RNA干扰...
PART1CRISPR–HOT基因编辑方法的建立 CRISPR-Cas9等基因编辑工具在消除疾病和遗传疾病方面具有巨大的应用潜力。将突变基因替换为正常基因有可能成为未来医生治疗患者的重要手段。类器官是可以在实验室中生长的微型器官。目前,类器官在生命科学研究中应用广泛,其在发育生物学、病理学、细胞生物学、精准医疗以及药物毒性和药效...
CRISPR/Cas9是一种可以实现精准基因编辑的有效工具,它可以被用来修改基因的突变,改变基因的表达,插入新的基因,以及删除不需要的基因等。 CRISPR/Cas9基因编辑技术是基于一种叫做CRISPR的自然现象,它能够识别并切割特定的DNA序列。这一技术的基本原理是利用一种叫做CRISPR-Cas9的RNA-蛋白质复合物,它能够精确地结合到特定...