而当目的基因序列两端插入方向相反的Loxp序列时，Cre可导致Loxp之间的序列发生反转，如图1c所示[2]。图1. Cre-Lox基因重组系统工作原理[2]利用Cre-Lox系统如何制备条件性敲除小鼠 Cre-Lox系统的优势在于可以利用组织特异性启动子特异性控制Cre在特定组织的表达，以实现在特定组织细胞中对目的基因的敲除或改造，更好的...
Cre-loxP 主要用于基因敲除，但它也会根据 loxP 位点的取向和位置诱导两个 loxP 位点之间的 DNA 反转和易位[1]。2常用的 Cre-loxP 诱变系统 图 2. Cre-loxP 诱变系统的原理[1]。 ▐ Cre-ER (Tam) 系统Cre-ER (Tam) 系统，也称为他莫昔芬 (Tamoxifen) 诱导的 Cre 系统，是 Cre-LoxP 系统中最为...
可以利用组织特异性启动子特异性控制Cre在特定组织的表达,以实现在特定组织细胞中对目的基因的敲除或改造,更好的规避全身敲除小鼠的胚胎致死现象。 高效性:Cre重组酶与具有loxP位点的DNA片段形成二聚体后,可提供足够的能力引发之后的DNA重组过程,过程简单高效。 ...
最终完成Cre-loxP系统条件性靶基因小鼠研制的操作，通常需要通过floxed小鼠与相应Cre小鼠间的两步遗传交配繁殖过程。第一步交配，X基因Cre杂合小鼠（X基因Cre/+）与Y基因 floxed杂合小鼠（Y基因lox/+，即CKO打靶Y基因)，或Y基因 floxed纯合小鼠（Y基因lox/lox）交配，获得X基因Cre/+; Y基因lox/+ 后代杂合小鼠。...
携带loxP的小鼠被称为Floxed小鼠,当它与Cre小鼠交配后,Cre-lox系统开始工作,可以对两个loxP位点以内的基因进行重组,进而实现基因敲除、表达等目的。 组织特异性敲除(Conditional Knockout, cKO) 如图2所示,当组织特异性Cre小鼠与Floxed小鼠配繁后,两个loxP位点位于同一条染色体上,且方向相同。Cre重组酶可以介导特定组织...
1. 组织特异性敲除(conditional knockout, cKO) 当组织特异性 Cre 小鼠(具有组织靶向性的 Cre 小鼠品系很多)与 Floxed 小鼠配繁后,两个 loxP 位点位于同一条染色体上,且方向相同。Cre 重组酶可以介导特定组织中两个同向 loxP 位点发生同源重组。致使“Gene X”处序列被删除,如果该序列的删除使得该基因发生移码突...
1)位点特异重组系统 位点特异重组系统(site-specific recombination system)是一种通过特定酶在基因组特定位点上进行DNA重组的技术,可以实现基因的插入、删除、反转和易位。 以下是几个常用的位点特异重组系统: A. Cre-loxP:该系统最早发现于噬菌体P1中,是目前应用最广泛的条件性基因编辑工具 (Nagy, A. 2000)[6]...
该系统是通过两种转基因技术相互配合实现的,即Cre重组酶和loxp位点。Cre重组酶是一种由细菌噬菌体产生的酶,能够识别和剪切含有loxp位点的DNA序列,从而实现特定区域的基因敲除。 Cre-loxp系统的原理如下: 1. Cre重组酶的表达:首先,使用基因工程技术将Cre酶的编码基因嵌入到转基因小鼠的基因组中,使其能够在特定的组织...
基因敲除的核心原理是利用Cre-loxP系统，构建带有loxP位点的基因载体，转入细胞或动物模型，Cre酶在特定条件下切割并重排基因，从而实现基因的删除或改变。实验流程涉及体外构建、胚胎干细胞移植、植入、转基因小鼠的培育，以及通过交配观察敲除效果。为了提高Cre-loxP基因敲除效率，关键在于优化载体设计、提高转染...