Cre-LoxP基因敲除系统 Cre重组酶 1981年从P1噬菌体中发现,Cre重组酶基因编码区序列全长1029bp,编码有343个氨基酸组成的38kDa单体蛋白。它不仅具有催化活性,而且与限制酶相似,能识别特异的DNA序列,即loxP位点,使loxP位点间的基因序列被删除或重组。Cre重组酶有70%的重组效率,不借助任何辅助因子,可作用于多种结构的DN...
LoxP位点是噬菌体中长度为34bp的回文结构序列,具有方向性,LoxP的方向影响DNA重组的结果。目前已发现多种LoxP位点,均可被Cre酶识别。Cre-LoxP系统经常被用于化学遗传激活和基因敲除领域。 DIO-mCherry质粒是基于Cre重组酶活性报告质粒。该质粒包含CAG启动子、正向LoxP、正向LoxP 2272、反向mCherry、反向LoxP、反向LoxP 2...
Cre是一种在噬菌体中发现的重组酶,能够识别特异性位点(LoxP),使2个LoxP位点之间的DNA序列发生精确重组。LoxP位点是噬菌体中长度为34bp的回文结构序列,具有方向性,LoxP的方向影响DNA重组的结果。目前已发现多种LoxP位点,均可被Cre酶识别。Cre-LoxP系统经常被用于化学遗传激活和基因敲除领域。 DIO-mCherry质粒是基于Cr...
特异性重组的Cre/loxP敲除系统是首先利用同源重组将基因组上的靶基因替换为两端带有重组位点loxP的kanR基因,然后由重组酶Cre识别loxP位点并发生重组反应,去除基因组上的kanR基因,进一步利用质粒的温敏特性将其消除,从而实现靶基因的敲除。下图是研究人员利用Cre/loxP敲除系统敲除谷氨酸棒状杆菌argR基因(精氨酸代谢的调控因子...
Cre重组酶发现于噬菌体，能识别LoxP位点，进行精确DNA重组。LoxP位点，34bp回文结构，具有方向性，影响重组结果。多LoxP位点被Cre酶识别，应用于化学遗传激活与基因敲除。DIO-mCherry质粒基于Cre酶活性报告机制，包含CAG启动子、LoxP、反向mCherry、WPRE等结构。Cre作用下，反向mCherry序列翻转，正常翻译m...
图5. Cre-LoxP调控基因表达转换 (5)FLEx Switch:在哺乳动物细胞和动物中,该常规质粒FLEX(Flip-Excision)条件性基因表达载体系统Cre-switch,通过Cre重组酶条件性控制两个ORF的表达。FLEX Cre-switch系统利用位于两个平行反向ORF两侧的Lox-变体重组位点,在Cre重组酶的调控下失活一个目的基因的表达,而激活另一个目的基...
https://www.youtube.com/watch?v=b4ju8IjhA68Cre-LoxP system 谱系示踪 基因敲除, 视频播放量 3750、弹幕量 1、点赞数 23、投硬币枚数 1、收藏人数 43、转发人数 20, 视频作者 cici33w, 作者简介 Med进阶中 & cardiovas 科研民工 :D,相关视频:五旬德爷“单挑”B站!请粉
另外也采用了lox66/71的非对称loxP序列以进一步降低质粒在细菌复制过程的自发重组，当然相比较于loxP和lox2272，Cre酶对lox66/71的重组效率也被降低。Cre-loxP系统的应用 为什么可以用两种小鼠杂交还需要使用病毒呢？这是因为相对于小鼠杂交，使用病毒实现目的基因的OE/KD往往具有更短的实验周期和更低的实验成本。另外...
同样,在目标基因两侧带有特定的重组酶识别位点(如 loxP 位点),重组酶在热激诱导下表达后,会作用于这些位点,引发基因敲除。这种系统对于研究基因在热应激反应或在特定温度敏感的生理过程中的功能非常有用。 定制服务 弓形虫热休克蛋白(Hsp90)敲除质粒及过表达质粒 ...