Cre/LoxP是做基因修饰鼠最常用的工具, 如图2所示,含有Cre(催化两个位点间的基因序列发声环化重组的一种酶)的鼠与含有LoxP(能被Cre特异识别的一段34个碱基的DNA序列)的鼠交配,产生既含有Cre又有LoxP的鼠,在Cre重组酶的催化下,两个LoxP位点的序列发生环化重组删除,从而达到目的基因编辑,通过与组织特异性Cre交配产生...
最终完成Cre-loxP系统条件性靶基因小鼠研制的操作，通常需要通过floxed小鼠与相应Cre小鼠间的两步遗传交配繁殖过程。第一步交配，X基因Cre杂合小鼠（X基因Cre/+）与Y基因 floxed杂合小鼠（Y基因lox/+，即CKO打靶Y基因)，或Y基因 floxed纯合小鼠（Y基因lox/lox）交配，获得X基因Cre/+; Y基因lox/+ 后代杂合小鼠。...
要想实现小鼠条件性靶基因编辑及功能相关研究,前提是分别获得两种小鼠模型:即构建含两个loxP位点序列floxed靶基因的小鼠和细胞/组织特异性表达Cre小鼠。 比如,为了开展某靶基因的条件性敲除(CKO)研究, 首先要构建该靶基因的打靶载体,即将两个loxP位点分别克隆到该靶基因DNA区域的两端,再借助CRISPR/Cas 受精卵注射或赛...
3. 需要在特定的靶细胞/组织中鉴定Cre作用活性,以确保其作用的靶向特异性 4. Cre-loxP重组系统与其他重组系统联合应用,增加细胞谱系示踪研究的特异性及有效性 5. 新型诱导性DD-cre小鼠模型的建立,成为未来Cre-loxP可诱导重组系统的补充 6. Cre小鼠构建策略建议性指导原则及需要考虑的因素概括 基因编辑小鼠模型是当...
五、Cre转基因小鼠模型中Cre插入位点鉴定的挑战与重要性 六、Cre-loxP位点重组系统应用中常见风险及影响因素 七、Cre-loxP位点特异性重组系统应用中的思考与建议 正文 一、Cre-loxP位点特异性重组系统应用基本原理 所谓Cre-loxP位点特异性...
由于Cre重组酶非特异性识别并作用于基因组中与loxP位点相似的序列,也称隐秘loxP(cloxP) 位点,引起Cre-cloxP位点的非特异性重组切割作用,从而有可能导致重要或关键基因破坏,轻则引起非特异性细胞表型,重则研究组织器官破坏或小鼠死亡。 对Tek-Cre小鼠模型进行基因插入位点分析研究表明,由于Cre的随机插入,导致241-kb大小...
flox cre小鼠基因型鉴定流程floxed cre 鼠标代表一种基因工程的菌株,其特征是有loxP站点侧绕特定基因或基因。 将这种肌肉模型基因化的目的是明确确认软体基因和cre rbinase基因的存在。 这种验证是研究人员不可或缺的先决条件,因为它直接影响到鼠标的phenotypic和行为特征。 基因分解程序要求从老鼠身上提取DNA,然后扩大...
例如:敲除小鼠胚胎发育过程中必需的基因Pten会导致胚胎死亡,而使用条件性基因编辑在成年小鼠的特定组织中敲除Pten,可以研究其在肿瘤发生中的作用(Groszer, M., 2001)[2]。 2)减少非特异性效应 全身性敲除一个基因可能会引起广泛的生理变化,掩盖了研究目标基因在特定组织或细胞类型中的功能。条件性基因编辑可以在特定...
最终完成Cre-loxP系统条件性靶基因编辑小鼠研制的操作,通常需要通过floxed小鼠与相应Cre小鼠间的两步遗传交配繁殖过程。第一步交配,X基因Cre杂合小鼠(X基因Cre/+)与Y基因 floxed杂合小鼠(Y基因lox/+,即CKO打靶Y基因),或Y基因 floxed纯合小鼠(Y基因lox/lox)交配,获得X基因Cre/+; Y基因lox/+ 后代杂合小鼠。第二...
而且转基因动物的饲养、基因型鉴定都需要不少的人力、物力，而病毒的制备、保存和注射所花的费用相对来说是比较少的。03更短的实验周期由于病毒能非常迅速的起作用，而转基因小鼠的交配过程特别耗时间，因此采用注射病毒到转基因小鼠体内的方式，可以大量缩短实验周期。#北极鲶鱼事件涉事局长被开除党籍# ...