CIAO采用了ATG-OUT的构建方式,将ATG和目的基因的ORF放在Lox序列两侧,也就是如果未发生重组,目的基因不是完整的,即使目的基因所在链有转录发生,也不会翻译出有功能的蛋白。另外也采用了lox66/71的非对称loxP序列以进一步降低质粒在细菌复制过程的自发重组,当然相比较于loxP和lox2272,Cre酶对lox66/71的重组效率也被降...
DIO序列策略的关键在于引入两对不同的lox位点：LoxP和Lox2272。在Cre酶的作用下，不论是识别LoxP还是Lox2272位点，第一步都可以实现目标基因的反转。反转会使两个loxP位点或者Lox2272位点变成同向。第二步在Cre酶的作用下，剪切删除一个LoxP位点和一个Lox2272位点，进而实现基因的稳定表达。02LSL序列策略 LSL序列策略...
CIAO采用了ATG-OUT的构建方式,将ATG和目的基因的ORF放在Lox序列两侧,也就是如果未发生重组,目的基因不是完整的,即使目的基因所在链有转录发生,也不会翻译出有功能的蛋白。另外也采用了lox66/71的非对称loxP序列以进一步降低质粒在细菌复制过程的自发...
在这种策略下,任一对Lox位点间的序列会在Cre的作用下发生可逆的快速翻转,之后Cre重组酶马上不可逆地切割翻转后的同向Lox位点,只留下翻转后的基因和单独的LoxP、Lox2272位点,防止基因的再次翻转。这种巧妙的设计让科研人员可以在病毒载体中构建DIO和反向基因,感染Cre阳性细胞后,可以让Cre阳性的细胞表达基因,是为DIO结...
除了野生型loxP外，还常见到lox 22lox 511和lox 5171等突变体。# Cre-loxP系统基因重组原理 DNA重组的结果，主要受到loxP位点方向和位置的影响，具体可分为以下三种情况：Deletion（删除）：当两个loxP位点位于同一条染色体上且方向一致时，Cre重组酶会删除这两个loxP位点之间的DNA序列。Inversion（倒转）：若两个loxP...
如果四个loxP位点分别位于两条不同的DNA链或染色体上,Cre重组酶能诱导loxP间的序列互换(cassette exchange) 两种策略实现Cre依赖的基因表达 01 DIO序列策略 DIO序列策略的关键在于引入两对不同的lox位点:LoxP和Lox2272。在Cre酶的作用下,不论是识别LoxP还是Lox2272位点,第一步都可以实现目标基因的反转。反转会使两个...
利用Cre-lox系统在小鼠体内实现对基因的时空特异性打靶(表达或敲除),原则上需要建立两种小鼠。 首先,建立特异性Cre小鼠,该小鼠中的Cre重组酶由特定启动子驱动,可在特定细胞或组织或全身表达Cre重组酶。Cre重组的特异性由驱动Cre的启动子或增强子控制。 其次,需要建立Flox小鼠,即在该小鼠靶基因序列侧翼带有Lox位点。将...
突变后的序列依然能被Cre重组酶识别和重组，但是突变的LoxP序列必须和同样突变的LoxP序列匹配介导基因重组，而不能和未突变的LoxP序列匹配，这样将不同的LoxP序列组合用于控制多个基因（DIO/DO系统中的Lox2272位点），在同一Cre重组酶的作用下，可以实现多序列的基因重组，产生非常多元的重组结果。
另外也采用了lox66/71的非对称loxP序列以进一步降低质粒在细菌复制过程的自发重组,当然相比较于loxP和lox2272,Cre酶对lox66/71的重组效率也被降低。 Cre-loxP系统的应用 为什么可以用两种小鼠杂交还需要使用病毒呢? 这是因为相对于小鼠杂交,使用病毒实现目的基因的OE/KD往往具有更短的实验周期和更低的实验成本。另外...
图1. Cre-Lox基因重组系统工作原理[2]利用Cre-Lox系统如何制备条件性敲除小鼠 Cre-Lox系统的优势在于可以利用组织特异性启动子特异性控制Cre在特定组织的表达，以实现在特定组织细胞中对目的基因的敲除或改造，更好的规避全身敲除小鼠的胚胎致死现象。1. Cre鼠的类型及应用 为了更好的控制Cre重组酶的表达时间，通过...