实时荧光定量PCR通常用于量化目标序列的绝对量或比较样本之间目标序列的相对量。该技术通过实时监测在扩增放大过程中目标特异性荧光信号的变化来展示扩增情况。虽然qPCR的荧光染料和探针是序列特异性的,但是大多数qPCR实验中都会出现相当多的背景荧光值。想要获得具有实际意义的目标序列真实情况,就需要排除掉背景荧光信号的影响。
在实时荧光定量PCR (qPCR) 中，Cq 值代表着 PCR 反应的阈值。Cq 值越低，说明模板开始翻倍的时间越...
在实时荧光定量PCR (qPCR) 中,Cq 值代表着 PCR 反应的阈值。Cq 值越低,说明模板开始翻倍的时间越早,即样本中的目标基因含量越高。因此,Cq 值可以用来估计目标基因表达量的相对水平。在qPCR 中,表达量通常使用 2^-ΔΔCt 方法进行分析,其中ΔΔCt 是指两个基因,如目标基因和参考基因,在不同样本之间的 Cq ...
这些值都是一样的,只是名称不同。为了规范qPCR的命名法,一般标准实验中会使用Cq值。 什么是 C q值? 定量PCR实验通常用于量化目标序列的绝对量或比较样本之间目标序列的相对量。该技术通过放大过程中发出的目标特异性荧光信号实时监测目标的扩增。 尽管实时荧光定量PCR中, 荧光染料和探针 应该是序列特异性的,但在大...
影响Cq值大小的因素有很多,实验过程中需要控制这些因素保证Cq值的准确性和真实性。Cq值在不同术语之间并无实质差异,但Cq值在qPCR中起着关键作用,可以用于比较不同样本之间的目标序列含量,也可以用于计算目标序列的绝对含量。因此,Cq值的计算和解释在定量PCR实验中具有重要意义。
荧光定量PCR（qPCR）是目前病原检测领域使用最为广泛的核酸检测方法（PCR检测技术概述）。尤其是非洲猪瘟...
当qPCR的Cq未出现数值时，可能由以下几个原因导致：PCR试剂 1. 样品中的目标序列浓度过低：如果待测...
QPCR实验中，若无模板加入却产生了Cq值，首先需检查退火温度是否充足，循环次数是否足够。排除操作失误后，问题可能源于引物二聚体或污染。进行以下步骤以排查问题：设计实验：分别使用引物与cDNA，不添加cDNA的引物组，以及内参与cDNA，进行普通PCR实验，并对产物进行电泳验证。内参验证操作正确性：若内参实验...
qPCR中一般选择前面的3-15个循环的荧光值作为背景值,取其mean+ 10*SD作为阈值线(Fig 1),这叫做Threshold Method。目前市面上几乎所有主流机器都采用这个策略作为默认的决定方式。我们讲过阈值线要设立在指数扩增期,但在背景期时PCR反应仍然是指数扩增。目前检测荧光信号的CCD设备,其检测灵敏度差不多在10^10个荧光...
指qPCR实验中只可以检测到目的基因,引物特异性扩增靶序列,而不会扩增其他基因序列。可通过凝胶电泳检测扩增产物是否为单一条带,或通过qPCR反应,根据溶解曲线是否具有单峰来判断。 ▲图5. 溶解曲线单峰 图源:Azure Cielo™实时荧光定量PCR系统 通过这六个方面就可以评估实时荧光定量PCR反应效果。你学会了吗?实验数据是...