(1)lowsaltwashbuffer-onewash (2)highsaltwashbuffer-onewash (3)LiClwashbuffer-onewash (4)TEbuffer-twowash 4.清洗完毕后,开始洗脱。 洗脱液的配方:100ul10%SDS,100ul1MNaHCO3,800ulddH2O,共1ml。 每管加入250ul洗脱buffer,室温下颠转15min,静置离心后,收集上清。重复洗涤一次。最终的洗脱液为每管500...
wash buffer配方: 50 mM Tris-HCl,pH 7.5 150 mM NaCl 0.05-0.1%Tween20或Triton x-100/NP-40 (6)免疫共沉淀向IgG beads加入1-1.5ml蛋白,在4℃旋转孵育2-3小时 (6)清洗凝胶珠并洗脱蛋白 Wash buffer清洗结合蛋白的beads三次,放在磁力架缓慢颠倒若干次,静置1min,小心吸去上清。GFP偶联beads直接加入蛋白...
我们用的珠子大多是买的,比如Sigma的FLAG、HA珠子等等。 🔥 洗脱珠子:洗好的珠子加上lysis buffer和SDS loading buffer,95度煮个5分钟就好了。这个步骤很重要,别忘了! 如果大家有其他小贴士,欢迎留言分享哦!祝大家实验顺利,再见!👋0 0 发表评论 发表 作者最近动态 奋斗日常的杰尼龟 2025-01-15 苏格拉底“产...
以500ul 裂解提取液(co-IPlysisbuffer)匀浆大约200-300mg植物材料(1.5ml离心管大 约装到500ul位置)。14,000rpm离心5分钟。将上清移至新管(此步为除去大块的 细胞碎片)。如离心不完全可再离心一次。用Bradford蛋白测定法确定总蛋白的 浓度。 Lysisbuffer: 50mMTris-HCl,pH7.5 150mMNaCl 1mMEDTA 10%glycerol ...
洗脱液的配方:100ul10%SDS,100ul1MNaHCO3,800ulddH2O,共1ml。 每管参加250ul洗脱buffer,室温下颠转15min,静置离心后,收集上清。重复洗涤一次。最终的洗脱液为每管500ul。 16、解交联:每管中参加20ul 5M NaCl〔NaCl终浓度为0.2M〕。 混匀,65oC解交联过夜。 第三天: 〔一〕、DNA样品的回收 17、解交联...
•现成配方可有效提取细胞质、膜和核蛋白 •不释放基因组DNA,不会导致样品粘度过高 Protocols Procedure for Lysing Cell Monolayer (Adherent) Cultures 1. Carefully remove culture medium from cells. Wash the cells once with ice cold phosphate-buffered saline. 2. Add ice cold lysis buffer to the cel...