b. high salt washbuffer---one wash c. LiCl washbuffer---one wash d. TE buffer---twowash 15. 清洗完毕后,开始洗脱。洗脱液的配方:100 ul 10%SDS, 100 ul 1 M NaHCO3, 800 ul ddH2O,共1 ml。 每管加入250 ul洗脱buffer,室温下颠转15min,静置离心...
(1)low salt wash buffer-one wash (2)highsalt wash buffer-one wash (3)LiCl wash buffer-one wash (4)TE buffer-two wash 4. 清洗完毕后,开始洗脱。 洗脱液的配方:100 ul 10%SDS,100 ul1M NaHCO3,800 ul ddH2O,共 1 ml。 每管加入 250 ul 洗脱 buffer,室温下颠转 15 min,静置离心后,收集...
SDS Lysis Buffer配方:50 mM HEPES-KOH pH7.5140 mM NaCl1 mM EDTA pH81% T 4、riton X-1000.1% Sodium Deoxycholate0.1% SDSProtease Inhibitors (每次新鲜加入)注意事项:使用悬浮细胞实验时,加入0.75% (v/v)的甲醛和甘氨酸后,5分钟,1000g离心沉淀细胞。冰冷 PBS 洗 3 次,用 SDS Lysis Buffer重悬细胞(每...
洗脱液的配方:100ul10%SDS,100ul1MNaHCO3,800ulddH2O,共1ml。 每管加入250ul洗脱buffer,室温下颠转15min,静置离心后,收集上清。重复洗涤一次。最终的洗脱液为每管500ul。 16、解交联:每管中加入20ul 5M NaCl(NaCl终浓度为0.2M)。 混匀,65oC解交联过夜。 第三天: (一)、DNA样品的回收 17、解交联结束...
4、倒去上清，加入1ml Scell Lysis Buffer，冰上放置10min，匀浆器匀浆后转入2ml Ep管中，4℃ 5000RPM离心5min.5、弃上清，300ul nuclei Lysis buffer，吹散沉淀。6、socinate破碎：1min on off 30 10次左右，4℃ 13000RPM离心20min，琼脂糖胶电泳，亮带集中在1000bp左右的方可。 (以便暴露目标蛋白，...
3) 取出SDS Lysis Buffer,放置至常温确保SDS溶解不析出; 4) Protease Inhibitor Cocktail II恢复至室温。 正式步骤: 1) 于培养瓶中加入终浓度为1%的甲醛,室温孵育10min; 2) 每个培养皿加入2 ml 10X Glycine(甘氨酸)混匀,室温放置5min,以中和甲醛反应; ...
d. TE buffer 两次 4) 清洗完毕后,开始洗脱。洗脱液的配方:100ul10%SDS,100ul1MNaHCO3,800ulddH2O,共 1 ml。每管加入250ul 洗脱 buffer,室温下颠转 15 min,静置离心后,收集上清。重复洗涤一次。*终的洗脱液为每管 500ul. 5) 解交联:每管中加入 20ul 5M NaCl(NaCl 终浓度为 0.2M)。混匀,65 度...
洗脱液的配方： 100ul 10 % SDS， 100ul 1M NaHCO3 ， 800ul ddH2O ，共 1ml 。每管加入 250ul 洗脱 buffer ，室温下颠转 15min ，静置离心后，收集上清。重复洗涤一次。终的洗脱液为每管 500ul 。16、解交联：每管中加入 20ul 5M NaCl (NaCl 终 浓 度为 0.2M )。混匀，65 度解...
200ul洗脱液的配方:10ul20%SDS,20ul 1M NaHCO3,170ul ddH2O。(事先将1MNaHCO3置于室温和65度水浴),可以一起准备8.5*。 每管加入100ul洗脱buffer,室温下颠转15min,3000-5000g离心1min,收集上清。重复洗涤一次。最终的洗脱液为每管200ul。对照input中直接加入200ul洗脱buffer。 16、解交联:每管(input)中...