6. 倒去上清。按照细胞量,加入SDS Lysis Buffer。使得细胞终浓度为每200 ul含2×10的6次方个细胞。这样每100 ul溶液含1×10的6次方个细胞。再加入蛋白酶抑制剂复合物。假设MCF7长满板为5×10的6次方个细胞。本次细胞长得约为80%。即为4×10的6次方个细胞。因...
按照细胞量,加入SDS Lysis Buffer。使得细胞终浓度为每200 ul含2×10的6次方个细胞。这样每100 ul溶液含1×10的6次方个细胞。再加入蛋白酶抑制剂复合物。假设MCF7长满板为5×10的6次方个细胞。本次细胞长得约为80%。即为4×10的6次方个细胞。因此每管加入400 ul SDS Lysis Buffer。将2管混在一起,共800...
6. 倒去上清。按照细胞量,加入SDS Lysis Buffer。使得细胞终浓度为每200 ul含2×10的6次方个细胞。这样每100 ul溶液含1×10的6次方个细胞。再加入蛋白酶抑制剂复合物。假设MCF7长满板为5×10的6次方个细胞。本次细胞长得约为80%。即为4×10的6次方个细胞。因此每管加入400 ul SDS Lysis Buffer。将2管...
按照细胞量,加入 SDS Lysis Buffer。使得细胞终浓度为每 200ul 含 2×106 个细胞。这样每 100 ul 溶液含 1×106 个细胞。再加入蛋白酶抑制剂复合物。假设 MCF7 长满板为 5×106 个细胞。本次细胞长得约为 80%。即为 4×106 个细胞。因此每管加入 400 ul SDS Lysis Buffer。将 2 管混在一起,共 8...
6、倒去上清。按照细胞量,加入SDS Lysis Buffer。使得细胞终浓度为每200ul含2×106个细胞。这样每100ul溶液含1×106个细胞。再加入蛋白酶抑制剂复合物。假设MCF7长满板为5×106个细胞。本次细胞长得约为80%。即为4×106个细胞。因此每管加入400ul SDS Lysis Buffer。将2管混在一起,共800ul。
按照细胞量,加入SDS Lysis Buffer.使得细胞终浓度为每200ul含2×106个细胞.这样每100ul溶液含1×106个细胞.再加入蛋白酶抑制剂复合物.假设MCF7长满板为5×106个细胞.本次细胞长得约为80%.即为4×106个细胞.因此每管加入400ul SDS Lysis Buffer.将2管混在一起,共800ul.7、超声破碎:VCX750,25%功率,4.5...
6、倒去上清。按照细胞量,加入SDS Lysis Buffer。使得细胞终浓度为每200μl含2×106个细胞。这样每100μl溶液含1×106个细胞。再加入蛋白酶抑制剂复合物。假设MCF7长满板为5×106个细胞。本次细胞长得约为80%。即为4×106个细胞。因此每管加入400μl SDS Lysis Buffer。将2管混在一起,共800μl。
将SDS Lysis Buffer适当温浴,使其中的SDS充分溶解,并混匀。 将细胞培养于10cm细胞培养皿中,细胞培养液的用量为10mL。在预期发生目的蛋白和基因组DNA结合的时间点,直接在细胞培养液中加入适量甲醛,轻轻混匀,至最终浓度为1%。随即在37℃孵育10分钟,以交联目的蛋白和相应的基因组DNA。例如,对于常规的每个10cm细胞...
因此每管加入400 ul SDS Lysis Buffer。将2管混在一起,共800 ul。7. 超声破碎:VCX750,25%功率,4.5 s冲击,9 s间隙。共14次。二、除杂及抗体哺育(第一天)1. 超声破碎结束后,10 000 g 4℃离心10 min。去除不溶物质。2. 留取300ul做实验,其余保存于-80℃。3. 300 ul中,100 ul加抗体做为实验组;...
步骤一：细胞处理。取10cm培养皿的细胞，加入1%甲醛进行交联，随后用甘氨酸终止并清洗细胞，收集后加入SDS Lysis Buffer，进行超声破碎以释放复合物。步骤二：杂交及抗体孵育。超声破碎后，离心去除不溶物，分离实验组（加入抗体）、对照组（不加抗体）和解交联组（加入NaCl处理）。然后加入抗体抗体/Agarose...