Proteintech开发的Co-IP裂解液是一款较温和的裂解液,可用于从细胞、组织中制备非变性蛋白裂解物。特别推荐用于免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)实验,亦可用于ELISA、WB、IP等实验。本产品主要成分为Tris (pH 7.4),NaCl,Triton X-100,不含其它酶抑制剂,所以制备的裂解物还可应用于某些特定的酶切实验(如λ...
1、样品裂解-温和裂解 温和的裂解液进行裂解,常用的去垢剂成分:NP-40、TritonX-100、IGEPAL CA-630、CHAPS; 成品buffer推荐:CST/9803S,Merck Millipore/20-188; 添加蛋白酶抑制剂(防止蛋白被降解):Merck Millipore/539134。 ▲常用的去垢剂成分作用对比 ▲常用buffer、蛋白酶抑制剂推荐 样本制备流程: 去掉培养基,...
免疫沉淀/免疫共沉淀 (Immunoprecipitation/Co-immunoprecipitation, IP/Co-IP) 是经典地研究蛋白质-蛋白质相互作用 (Protein-Protein Interaction, PPI) 和蛋白质翻译后修饰 (Post-translational Modification, PTM) 的实验技术。 选择适合的裂解液(lysis buffer),既能充分提取蛋白质,同时又能保持蛋白质的天然构象和活性...
我们以常用的ripa裂解液为例主要含有左右的离子缓冲液接近生理浓度下的nacl一定比例的去垢剂和甘油以及各类蛋白酶抑制剂等来说明其各主要成份的用途进而帮助我们如何针对不同的实验目的和不同的蛋白质特性来选择最佳的裂解液 Co-IP原理与方法 免疫沉淀(Immunoprecipitation, IP)原理...
CO-IP是基于抗体与抗原特异性结合，以及“Protein A/G”结合抗体FC段的原理，用于研究蛋白质复合体间的相互作用。二、主要步骤 试剂准备，细胞处理，抗体结合，抗原抗体复合物沉淀，清洗，上样，煮沸，电泳分析。三、实验解疑 1. 抗原未沉淀：确认抗原量、抗体特异性、裂解液成分。2. 抗体条带掩盖目标...
IP 裂解/洗涤缓冲液，2 50mL，0.025MTris，0.15M NaCl，0.001M EDTA，1% NP-40，5%⽢油；pH 7.4 改良型杜⽒PBS （20×），25mL，使⽤时稀释⾄：0.008M Na 、0.14MNaCl、0.01M KCl；pH7 100×条件缓冲液，5mL，中性pH 缓冲液 洗脱缓冲液，50 mL，pH 2.8，含有伯胺 ⾮还原型泳道...
通常情况下,10 的HeLa细胞可以产生约10mg 胞团块,按照~3μg/μL的配比使用 IP 裂解/洗涤缓冲液(即 100μL IP 裂解/洗涤缓冲液可以裂解 ~300μg 细胞团块 •为了获得最佳结果,可添加ThermoScientificHalt 蛋白酶(货号:78429 )和磷酸酶(货号:78420) •IP裂解/洗涤缓冲液可兼容Thermo Scientific Pierce BCA ...
免疫共沉淀(Co-IP)原理及步骤(二) 一.实验流程 (1)转染后24-48 h 可收获细胞,加入适量细胞裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂),冰上裂解30min, 细胞裂解液于4°C,最大转速离心30 min后取上清; (2)取少量裂解液以备Western blot分析,剩余裂解液加1μg相应的抗体加入到细胞裂解液,4°C缓慢摇晃孵育过夜; ...
淬灭缓冲液,50 mL,1MTris-HCl 洗涤缓冲液,60 mL,1MNaCl IP裂解/洗涤缓冲液,2 50mL,0.025MTris,0.15MNaCl,0.001MEDTA,1% NP-40,5%甘油;pH 7.4 改良型杜氏PBS(20×),25mL,使用时稀释至:0.008MNa、0.14MNaCl、0.01MKCl;pH7 100×条件缓冲液,5mL,中性pH缓冲液 洗脱缓冲液,50 mL,pH 2.8,含有伯胺 非还原...