特异性 通常很好,但有时会有非特异性相互作用 极佳,但有时会有交叉反应 极佳(由于选择可以进行IP且没有交叉反应的抗体组成单克隆抗体群) 优点 亲和力高(由于抗体可以与目的蛋白的多个抗原决定簇相互作用) 特异性好,且可以无限量供应 特异性好,亲和力高(由于选择可以进行IP且没有交叉反应的抗体组成单克隆抗体群)...
一、抗体选择策略 1.选择经过IP验证的抗体：使用经过IP验证的抗体可以显著降低假阳性概率，因为这些抗体已经过专门优化，适用于免疫沉淀实验。2.考虑抗体的特异性：选择特异性强的抗体可以减少非特异性结合，从而降低杂带干扰。单抗通常具有更高的特异性，但也可能存在亲和力较低的问题。多抗虽然亲和力较好，但特异性可...
如果是传统抗体(来源于鼠/兔等)偶联beads,则还是需要根据IP捕获抗体和WB检测一抗的类型进行二抗选择。 如果使用纳米抗体试剂Nano-Trap,因其beads上偶联的纳米抗体来源于羊驼,无重轻链干扰,因此直接选择WB检测的一抗和普通二抗即可。 HA-Trap在IP中捕获TOM70-HA融合蛋白,IP产物中无重链和轻链条带 总结 ① 使用与I...
内源性 Co-IP 实验可选择蛋白 A/G 磁珠或蛋白 A/G 琼脂糖;外源性 Co-IP 实验中蛋白携带标签 (如 Flag、HA、c-Myc、GST 等),可以选择标签抗体类磁珠/琼脂糖凝胶珠 (如 Anti-Flag 磁珠、Anti-HA 磁珠、Anti-c-Myc 磁珠、Anti-GST 磁珠等),可一定程度增强丰度,减少 IgG 干扰。 Co-IP 结果解读 随着C...
4、免疫共沉淀(Co-IP)中抗体怎么选择? 多克隆抗体 单克隆抗体单克隆抗体群(由一个免疫原产生的多个单克隆抗体混合物) 抗体抗原信号强度 极佳 由抗体的亲和力决定(极佳或者极弱) 极佳 特异性 通常很好,但有时会有非特异性相互作用 极佳,但有时会有交叉反应 极佳(由于选择可以进行IP且没有交叉反应的抗体组成单克...
在这里,您轻轻地打开您的细胞,使您的蛋白质接触到抗体。 裂解方法在 Co-IP 中很重要。 非去污剂、低盐裂解缓冲液是可溶性蛋白质 Co-IP 的流行选择。 这种裂解最不可能干扰任何蛋白质相互作用。 然而,对于溶解度较低的蛋白质复合物,裂解缓冲液可能需要包含非离子去污剂,例如 NP-40 或 Triton X-100。 留出时...
选对抗体是我们实验成功的关键所在。在进行Co-IP实验前,我们需要确认抗体可以用于Co-IP实验。因为在Co-IP实验中,抗体需要识别蛋白的构象表位,只能识别线性表位的抗体可能无法将靶蛋白沉淀出来,并不是所有的抗体都可以用于Co-IP实验。所有在选择抗体的时候要选适用于Co-IP的抗体哦。 同时,我们也列出了单抗与多抗的...
Co-IP抗体的选择 在进行Co-IP实验前,需要确认抗体可以用于Co-IP实验。在Co-IP实验中,抗体需要识别蛋白的构象表位,只能识别线性表位的抗体可能无法将靶蛋白沉淀出来,因此并不是所有的抗体都可以用于Co-IP实验。另外,用于IP靶蛋白的抗体与用于Weatern Blot检测目的蛋白的抗体最好是不同种属的,以避免抗体污染。(为什么...