一、抗体选择策略 1.选择经过IP验证的抗体：使用经过IP验证的抗体可以显著降低假阳性概率，因为这些抗体已经过专门优化，适用于免疫沉淀实验。2.考虑抗体的特异性：选择特异性强的抗体可以减少非特异性结合，从而降低杂带干扰。单抗通常具有更高的特异性，但也可能存在亲和力较低的问题。多抗虽然亲和力较好，但特异性可...
特异性 通常很好,但有时会有非特异性相互作用 极佳,但有时会有交叉反应 极佳(由于选择可以进行IP且没有交叉反应的抗体组成单克隆抗体群) 优点 亲和力高(由于抗体可以与目的蛋白的多个抗原决定簇相互作用) 特异性好,且可以无限量供应 特异性好,亲和力高(由于选择可以进行IP且没有交叉反应的抗体组成单克隆抗体群)...
如果是传统抗体(来源于鼠/兔等)偶联beads,则还是需要根据IP捕获抗体和WB检测一抗的类型进行二抗选择。 如果使用纳米抗体试剂Nano-Trap,因其beads上偶联的纳米抗体来源于羊驼,无重轻链干扰,因此直接选择WB检测的一抗和普通二抗即可。 HA-Trap在IP中捕获TOM70-HA融合蛋白,IP产物中无重链和轻链条带 总结 ① 使用与I...
内源性 Co-IP 实验可选择蛋白 A/G 磁珠或蛋白 A/G 琼脂糖;外源性 Co-IP 实验中蛋白携带标签 (如 Flag、HA、c-Myc、GST 等),可以选择标签抗体类磁珠/琼脂糖凝胶珠 (如 Anti-Flag 磁珠、Anti-HA 磁珠、Anti-c-Myc 磁珠、Anti-GST 磁珠等),可一定程度增强丰度,减少 IgG 干扰。 Co-IP 结果解读 随着C...
以下是为 Co-IP 选择优质抗体的一些技巧。 使用先前已证明可沉淀蛋白质的抗体(例如,来自文献)。 尽可能选择多克隆抗体而不是单克隆抗体。 多克隆抗体将在不同位置结合您的蛋白质,这意味着成功进行 Co-IP 的机会更大,并最大限度地减少潜在问题,例如您的抗体是否识别与您试图寻找的伴侣结合的位点。
3、免疫共沉淀(Co-IP)中抗体怎么选择? 5、Co-IP实验中没有检测到与目的蛋白相互作用的蛋白或检测得到的信号太弱? 裂解液中去垢剂浓度过高或者配方太强烈; 蛋白和蛋白之间的相互作用太弱或不稳定。 6、IP和CoIP有什么区别? IP是在已知一种蛋白质的抗体情况下,直接用这种抗体...
选对抗体是我们实验成功的关键所在。在进行Co-IP实验前,我们需要确认抗体可以用于Co-IP实验。因为在Co-IP实验中,抗体需要识别蛋白的构象表位,只能识别线性表位的抗体可能无法将靶蛋白沉淀出来,并不是所有的抗体都可以用于Co-IP实验。所有在选择抗体的时候要选适用于Co-IP的抗体哦。 同时,我们也列出了单抗与多抗的...
Co-IP抗体的选择 在进行Co-IP实验前,需要确认抗体可以用于Co-IP实验。在Co-IP实验中,抗体需要识别蛋白的构象表位,只能识别线性表位的抗体可能无法将靶蛋白沉淀出来,因此并不是所有的抗体都可以用于Co-IP实验。另外,用于IP靶蛋白的抗体与用于Weatern Blot检测目的蛋白的抗体最好是不同种属的,以避免抗体污染。(为什么...