与IP抗体同源同型(亚型)的抗体:如 Rabbit IgG;Mouse IgG1, etc; 取与IP实验等量的裂解液,使用Isotype Control孵育;与IP抗体孵育同时进行。 Isotype Control选择: 预纯化的目的: 减少裂解混合物中的非特异性蛋白的含量。 同时减少了可能与Protein A/G发生交叉反应的蛋白含量。 根据IP实验结果
根据结果图信息，首先从最左边的一列可以知道该结果是探讨BRD9和FOXP1之间是否存在相互作用；并且二者都没有带标签，因此IB检测直接用针对目的蛋白的抗体；然后Input组为阳性对照，IgG为IP组的阴性对照，anti-FOXP1是IP的实验组，即表示分别用IgG和FOXP1的抗体进行WB检测蛋白复合物。结果显示，Iuput组中均检测到了B...
与IP抗体同源同型(亚型)的抗体:如 Rabbit IgG;Mouse IgG1, etc; 取与IP实验等量的裂解液,使用Isotype Control孵育;与IP抗体孵育同时进行。 Isotype Control选择: 预纯化的目的: 减少裂解混合物中的非特异性蛋白的含量。 同时减少了可能与Protein A/G发生交叉反应的蛋白含量。 根据IP实验结果,可以调整每次IP的总...
IP组相对于IgG组有更多蛋白条带、且存在差异，说明 Co-IP过程捕获到互作蛋白；IP产物在质谱检测中鉴定到的蛋白数量不能作为判断实验成败的标准，因为这取决于目的蛋白本身所具有的互作蛋白数量、结合力强弱等方面；IP产物的质谱鉴定数量越多并不代表结果越好。
IP：全称immunoprecipitation，即免疫沉淀，这一步主要是为了纯化富集目的蛋白。Input：全细胞裂解液，含有细胞内所有的蛋白，可认为是阳性组。也就是处理完样本得到的细胞裂解液，在做IP实验之前，需要先跑WB，确认样本中含有蛋白A和蛋白B。Anti-A：A蛋白的免疫共沉淀抗体 IgG：Anti-A的同型对照抗体，即跟Anti-A同...
在co-ip-ms实验中，IgG对照是一种常用的实验对照。IgG是一种免疫球蛋白，与目标蛋白质无特异性结合。因此，将IgG作为对照可以帮助我们判断实验结果是否受到非特异性结合的影响。五、为什么需要IgG对照？在co-ip-ms实验中，我们常常需要确定目标蛋白质与其他蛋白质的特异性相互作用。然而，由于实验条件的复杂性和蛋白...
根据结果图信息,首先从最左边的一列可以知道该结果是探讨BRD9和FOXP1之间是否存在相互作用;并且二者都没有带标签,因此IB检测直接用针对目的蛋白的抗体;然后Input组为阳性对照,IgG为IP组的阴性对照,anti-FOXP1是IP的实验组,即表示分别用IgG和FOXP1的抗体进行WB检测蛋白复合物。结果显示,Iuput组中均检测到了BRD9和...
“IP:Flag IB:Flag”这一步也是为了明确免疫沉淀特异性识别并利用磁珠/凝胶富集蛋白A的实验过程是成功的。 当然我们也有小伙伴选择以下分组方式 本实验一共分为两大组:Input部分及IP部分。 其中IP组又分为IgG组(阴性对照组)和实验组,并通过WB去验证蛋白A和B在每一个组里面是否存在。
(2)不含IgG对照组的形式: 单质粒转染的Co-IP(内源性蛋白A的抗体拉外源性标签蛋白B): 案例如下:转染HA-Ub质粒,然后用内源性的PKM2抗体去拉HA-ub,从而证明PKM2能够被泛素化。 实验设计分为2部分,1. 是看whole cell lysate(简写WCL)目的是为了证明内源性的蛋白是表达的,同时转染的HA-Ub质粒也是表达的。通常...
该图展示了验证TRAF2与RXRα相互作用的结果，实验分为input组、IgG组和IP组。通过分析三块凝胶，可以确认TRAF2与RXRα以及TRAF2与pRXRα之间存在显著的相互作用。这一发现为进一步探讨LncRNA DANCR在急性心肌梗死中的调控机制提供了重要线索。MT1G通过调控GPX4/SQSTM1轴促进铁自噬并抑制胃癌细胞功能。该图展示了验证...