验证蛋白质间相互作用的 Co-IP 检测; 验证蛋白质间相互作用的 GST Pull-down 检测。
为了确定AIB1是否可以直接与NICD结合,将大肠杆菌产生的GST-NICD蛋白与基于大肠杆菌提取物的无细胞蛋白质合成系统产生的AIB1蛋白孵育,进行GST pull down检测是否直接互作。 结果表明,GST-NICD蛋白,而不是GST,能够下调AIB1(图C),表明AIB1可以直接与NICD结合。为了确定AIB1的哪些结构域可以与NICD结合,在293T细胞中表达...
Co-IP是IP的延伸,主要是用于探测两个蛋白分子间是否存在特异性相互作用的一种方法。其原理是如果两个蛋白在体外体系能够发生特异性相互作用的话,那么当用一种蛋白的抗体进行免疫沉淀时,另一个蛋白也会被同时沉淀下来。基本原理也是抗原-抗体特异性结合,检测目的是蛋白间相互作用。 如何区分Co-IP和GST pull-down? ...
利用GST融合蛋白进行Pull-down的基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽标记的珠子(作为与目的蛋白亲和的支撑物)上, 充当诱饵蛋白, 目的蛋白溶液与之孵育, 可从中捕获与之相互作用的捕获蛋白(目的蛋白), 洗脱结合物后通过SDS...
1.原理: GST-pull down:GST-pull down是一种亲和纯化技术,利用谷胱甘肽S转移酶(GST)标记的蛋白质作为“鱼钩”,结合目标蛋白质的亲和结合区域,通过亲和纯化的方法将目标蛋白质及其结合蛋白质从混合物中分离出来。 CoIP:CoIP是共免疫沉淀技术,利用抗体特异性地结合目标蛋白质,然后通过免疫沉淀的方法将目标蛋白质及其结...
GST pull-down和Co-IP之间的男女关系 GST pull-down实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,近年来越来越受到广大学者的青睐。其基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种...
1. GST pull-down通常用来检测大量的非特异性蛋白质与目标蛋白相互作用。GST是一种载体蛋白,可以通过将其连接到表达靶蛋白上,在混合 物中捕获与该靶蛋白有相互作用的其他蛋白质。之后,利用GST标记的固定矩阵,用于分离以GST为基础的复合物。而CO-IP则主要用于检测两个 ...
GST pull down: GST pull-down实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术, 近年来越来越受到广大学者的青睐。 原理:将靶蛋白和GST组成的融合蛋白固定在谷胱甘肽(GSH)亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱...
co-ip/Pull down/SDS-Page条带等蛋白溶液---LCMSMS鉴定 胶条鉴定是目前使用最广泛的蛋白质组学研究手段,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE,Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis)分离蛋白质混合物,收集目的胶条,经胶内酶解后用于质谱分析以获得蛋白质信息。 实验原理 鹿明生物采用LCMSMS技术进行蛋白...