因此，Co-IP的实验步骤可大致概括为以下4步：（1）裂解蛋白，得到蛋白的混合物；（2）将靶蛋白的抗体与蛋白混合物共同孵育；（3）洗脱，得到拉下来的蛋白；（4）再将拉下来的蛋白当作样本，用其互作蛋白的抗体进行检测。图1 Co-IP实验原理及流程（伯远生物科研绘图）。Co-IP结果如何看？虽然了解过Co-IP的原理...
这些技术作为如今的研究中的常客，其中IP-MS是常用的在植物体内筛选互作蛋白的有效方法，Co-IP则常用于筛选后的蛋白之间的点对点验证，ChIP是用来研究蛋白质与DNA是否在体内存在相互作用，常用来检测转录因子结合位点，RIP用来研究细胞内RNA与蛋白质结合的技术，今天小源将选择IP-MS和Co-IP这两种技术，从原理、实验步骤...
Co-IP实验通常有两种,一种为内源性蛋白相互作用验证,另外一种为非内源性蛋白相互作用验证,内源性相互作用是指两蛋白相互作用在细胞内发生,即通过质粒共转染的方式将两种蛋白转染至同一细胞内表达,表达完成后收集细胞进行裂解得到蛋白样...
特异性抗体捕获样品中的靶蛋白,形成抗体-靶蛋白复合物,然后利用能够与抗体结合的珠状支持物(例如Nanoab-Agarose)来固定和沉淀复合物,同时与靶蛋白相互作用的蛋白也会被沉淀下来,最后洗去与靶蛋白相结合的非特异性蛋白,再通过SDS-PAGE进行分析、Western blot检测得到我们要验证的结果。因此,Co-IP的实验步骤可大致概括...
1.蛋白质复合物分析与鉴定 Co-IP通常用于分析和鉴定蛋白质复合物,使用质谱等技术分析并鉴定复合物中的各个组分或翻译后修饰(PTM)。这有助于了解蛋白复合物的组成和成分,以及PTM在蛋白质-蛋白质相互作用、信号通路,深入了解它们在细胞过程中的功能和作用[3] ...
Co-IP 优势可沉淀诱饵蛋白在天然组织细胞状态下存在互作关系的所有蛋白；可沉淀整个复合体中直接/间接互作的多个蛋白，研究复合体组成；可与质谱鉴定连用可以初筛到一系列未知蛋白，再通过其他技术进一步验证；分离得到天然状态下相互作用的蛋白质复合体，结果更真实可靠。Co-IP 分类根据抗体来源、靶蛋白表达方式及样本类型...
与普通 Co-IP 相比,Co-IP MS 是利用质谱来鉴定互作蛋白,普通 Co-IP 是使用 western 验证互作蛋白。两者前期 IP 的过程是没有差别的。Co-IP 本身不难,只要按照常规的步骤,严格的把控每一步的细节, Co-IP 的成功率就会很高。 Co-IP MS 流程 经验分享: (1)充足的样本量。足够的蛋白量是免疫共沉淀的关键...
1、测定两种目标蛋白质是否在体内结合；2、鉴定与特定蛋白相互作用的未知蛋白（通常与质谱连用，也称IP-MS）；3、分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。免疫共沉淀的优点 1、相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；2、蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；3、可以分离得到天然状态...
免疫共沉淀(Co-IP)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法,是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的有效方法。 其原理是使用靶蛋白特异性抗体间接捕获与特定靶蛋白结合的蛋白来鉴定体内相关的蛋白-蛋白相互作用,是研究蛋白质互作的经典方法。特异性抗体捕获样品中的靶蛋白,形成...
最后，通过分析富集的蛋白质，如凝胶电泳和质谱分析，可以鉴定和定量相互作用的蛋白质。2.解读Co-IP实验结果的重要性 Co-IP实验结果的解读对于理解蛋白质相互作用具有重要意义。通过解读实验结果，我们可以获得关于蛋白质分子量互作的有价值信息，包括以下方面：2.1验证已知相互作用：Co-IP实验可以用于验证已知的蛋白质...