IP:全称immunoprecipitation,即免疫沉淀,这一步主要是为了纯化富集目的蛋白。Input:全细胞裂解液,含有细胞内所有的蛋白,可认为是阳性组。也就是处理完样本得到的细胞裂解液,在做IP实验之前,需要先跑WB,确认样本中含有蛋白A和蛋白B。Anti-A:A蛋白的免疫共沉淀抗体 IgG:Anti-A的同型对照抗体,即跟Anti-A同...
7、变性以及还原蛋白 室温溶解蛋白上样缓冲液(5×),按照4 uL蛋白样品+1 ul (5×)的比例混合,IP组加入50ul蛋白上样缓冲液,在蛋白样品中加入含SDS(保证样品中的所有蛋白带电荷一致)的上样缓冲液,100℃加热煮沸,以充分变性蛋白。冰上骤冷,上样到SDS-PAGE胶加样孔即可。 二、经过SDS-PAGE分离样品 胶的选择与...
其原理是使用靶蛋白特异性抗体间接捕获与特定靶蛋白结合的蛋白来鉴定体内相关的蛋白-蛋白相互作用,是研究蛋白质互作的经典方法。特异性抗体捕获样品中的靶蛋白,形成抗体-靶蛋白复合物,然后利用能够与抗体结合的珠状支持物(例如Nanoab-Aga- rose)来固定和沉淀复合物,同时与靶蛋白相互作用的蛋白也会被沉淀下来,最...
Co-IP实验通常有两种,一种为内源性蛋白相互作用验证,另外一种为非内源性蛋白相互作用验证,内源性相互作用是指两蛋白相互作用在细胞内发生,即通过质粒共转染的方式将两种蛋白转染至同一细胞内表达,表达完成后收集细胞进行裂解得到蛋白样...
通过酵母双杂这一体内实验我们验证了蛋白可能互作,但由于酵母双杂假阳性率高这一缺点,导致是否互作还需要进一步验证。 这时候,假阳性概率相对更低的Co-IP实验就可以发挥出作用,蛋白质的相互作用可以在天然状态下进行,避免人为影响,还可以分离得到天然状态下相互作用的蛋白复合体,可以在双杂基础上进一步对互作进行验证。
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是一种利用抗原与抗体之间的专一性为基础,广泛应用于研究蛋白质与蛋白质相互作用的经典研究方法。 原理 其原理是如果细胞内两蛋白(A、B)有直接或间接的相互作用时,那么在温和的裂解条件下获得的蛋白样品中加入 A 蛋白的...
蛋白质组学是研究生物体内蛋白质的种类、数量、功能和相互作用的学科。在蛋白质组学中,测序、Co-IP与质谱共振是三个重要的技术手段。通过这些技术,科学家们可以深入了解蛋白质在细胞中的行为,进而揭示生物体的调控机制。1.测序揭示基因表达和蛋白功能 转录组数据是蛋白质组学研究的重要基础。转录组学是对特定条件...
图1 蛋白翻译后修饰的常见方式(Li et al., 2021)。Co-IP全称为免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation, Co-IP),是一种经典的生物学研究方法,用于检测和分析细胞内蛋白质之间的相互作用。基于抗原-抗体的特异性结合原理,旨在从细胞裂解物中捕获目标蛋白。实验中,首先使用特异性的抗体与诱饵蛋白结合,形成抗体-...
IP:即指免疫沉淀,用相应的抗体来纯化富集目的蛋白,例如图中“IP: Flag”意为使用Flag标签抗体磁珠下拉Flag,与Flag融合表达的蛋白为诱饵蛋白,与该融合蛋白相互作用的其他蛋白将因此被沉淀下来。 IB:即指免疫印迹或western blot(WB),用来检测目的蛋白的存在与否,例如图中“IB: Myc”是指用Myc抗体做WB检测,看样本中...
干货分享 | 蛋白实验—IP与CO-IP详细概述及结果解读 一、基本资料 免疫沉淀(IP)是一种基于抗原和抗体之间结合反应的实验技术,用于分离和检测蛋白质。 二、原理 IP是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“protein A/G"特异性地结合到抗体(免疫球蛋白)的FC片段的现象开发出来的方法。目前多用protein...