内源性 Co-IP 实验可选择蛋白 A/G 磁珠或蛋白 A/G 琼脂糖;外源性 Co-IP 实验中蛋白携带标签 (如 Flag、HA、c-Myc、GST 等),可以选择标签抗体类磁珠/琼脂糖凝胶珠 (如 Anti-Flag 磁珠、Anti-HA 磁珠、Anti-c-Myc 磁珠、Anti-GST 磁珠等),可一定程度增强丰度,减少 IgG 干扰。 Co-IP 结果解读 随着C...
IP-MS的原理是将细胞裂解液或组织提取液等蛋白混合体系与结合有目的蛋白特异性抗体或标签抗体的磁珠进行孵化，促进结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-protein-A/G小珠”复合物的形成。混合体系中能与目的蛋白相互作用的蛋白质通过特异性结合而与其他蛋白组分分离开来，通过蛋白纯化，获得与目的蛋白质相互作用的靶蛋白。最后通...
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法,用于确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用。与其他蛋白互作研究技术,比如酵母双杂、Pull-down等各有优势,其中Co-IP基于抗原和抗体之间结合,可以从复杂的细胞裂解液中特异性地分离和鉴定蛋白质复合...
其原理是使用靶蛋白特异性抗体间接捕获与特定靶蛋白结合的蛋白来鉴定体内相关的蛋白-蛋白相互作用，是研究蛋白质互作的经典方法。特异性抗体捕获样品中的靶蛋白，形成抗体-靶蛋白复合物，然后利用能够与抗体结合的珠状支持物（例如Nanoab-Agarose）来固定和沉淀复合物，同时与靶蛋白相互作用的蛋白也会被沉淀下来，最后洗...
1、一抗、二抗的稀释度、作用时间和温度对不同的蛋白要经过预实验确定最佳条件。 2、显色液必须新鲜配置使用,最后加入 H2O2。 3、DAB 有致癌的潜在可能,操作时要小心仔细。 五、注意事项 1、上样时,要迅速,避免样品扩散,也不能让样品溢出而造成相邻加样孔的交叉污染。
免疫共沉淀技术是一种研究两种蛋白在体内是否存在相互作用的有效方法,通过抗体和已知蛋白结合,从而捕获整个已知蛋白复合物,进而研究复合物中与已知蛋白存在相互作用的蛋白。 用途 蛋白质相互作用:测定两种目标蛋白质是否在体内结合; 蛋白质伴侣:确定一种特定蛋白质的新的作用搭档; ...
免疫共沉淀(Co-IP)是利用抗原与抗体之间的专一性作用为基础,用于研究蛋白质与蛋白质之间相互作用的经典方法。利用免疫共沉淀可以检测两个已知蛋白之间的相互作用,或者利用已知蛋白寻找与之相互作用的未知蛋白。 相较于其他分子间相互作用...
免疫共沉淀是一种利用抗体与抗原之间的特异性免疫反应来研究蛋白质间相互作用的方法。🔍 基本原理: 在细胞裂解液中加入抗原特异性抗体,通过免疫沉淀反应形成免疫复合物。经过纯化、洗脱后,可以通过SDS-PAGE电泳、Western blot或质谱鉴定出与抗原相互作用的蛋白质。🌈...
免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation, Co-IP)是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础,研究蛋白质相互作用,是确定两种蛋白质在完整细胞内生理性相互作用的经典方法。常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合;也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。 ...
Co-IP 其实就是用来验证两个蛋白(比如 AB)是否相互作用的方法。具体操作是,先制备一个含有 AB 两个目标蛋白的蛋白样品,然后用 A 蛋白或 B 蛋白的抗体挂在磁珠上,去拉这个蛋白样品。接着,用拉下来的溶液(蛋白)去做 Western blot(WB),用 A 蛋白抗体或 B 蛋白抗体去检测。如果两种抗体都能检测到,那就说明...