5、Co-IP实验对抗体有什么要求? 若是自身蛋白抗体,抗体需要达到IP级别,并且需要测试其效价,商业化的标签抗体也需要达到IP级别。 6、Co-IP实验如何避免出现假阳性? (1)若抗体浓度高,则降低抗体浓度;(2)若抗体特异性不好,则更换抗体; (3)若蛋白丰度非常高,则可以加大洗涤次数。 7、Co-IP中的ProteinA/G琼脂...
当然非内源性可以适当降低要求,没有这么苛刻。 (2)适合以及适量的抗体。IP 之前,一定要明确你的目标蛋白并且确认目标蛋白的抗体是否是 IP 级别的,否则实验很难进行。如果是鉴定带标签的目标蛋白的互作,推荐使用 sigma 的 flag 抗体,直接耦合 beads,使用非常方便,效价高,最重要的是避免了与重轻链大小相似的蛋白...
特异性 通常很好,但有时会有非特异性相互作用 极佳,但有时会有交叉反应 极佳(由于选择可以进行IP且没有交叉反应的抗体组成单克隆抗体群) 优点 亲和力高(由于抗体可以与目的蛋白的多个抗原决定簇相互作用) 特异性好,且可以无限量供应 特异性好,亲和力高(由于选择可以进行IP且没有交叉反应的抗体组成单克隆抗体群)...
充足的样本量是免疫共沉淀的关键因素之一。通常需要5-10 mg/ml的正常蛋白量，以确保内源性相互作用的检测。为了防止实验失败后样本不足，建议准备更多的样本，确保能进行至少1-2次WB检测。而对于非内源性蛋白，要求相对宽松一些。选择适合且适量的抗体对于免疫共沉淀至关重要。目标蛋白的抗体需要为IP级别...
为了确保最终得到的结果是天然状态下的相互作用，而不是假阳性，在Co-IP的实验设计过程中，需要设置正确的对照。假设Co-IP实验的实验组为“磁珠+抗X抗体+蛋白X+蛋白Y”，则可能出现的假阳性及对应需要设置的实验对照如下表所示：除此之外CO-IP实验还会设置一个阳性对照组（Input组），Input组为直接利用抗体X（抗体...
样品要求 需要您提供: 1.IP级别的抗体; 2.实验样本:组织样品>200mg,细胞样品>2×107 ,蛋白样品>2ml; 3.需要研究的互作蛋白信息(蛋白名称、大小、种属等)。 交付内容: 1.完整实验报告(包括实验相关试剂及设备信息、实验步骤); 2.原始数据及图片。
内源性 Co-IP 实验可选择蛋白 A/G 磁珠或蛋白 A/G 琼脂糖;外源性 Co-IP 实验中蛋白携带标签 (如 Flag、HA、c-Myc、GST 等),可以选择标签抗体类磁珠/琼脂糖凝胶珠 (如 Anti-Flag 磁珠、Anti-HA 磁珠、Anti-c-Myc 磁珠、Anti-GST 磁珠等),可一定程度增强丰度,减少 IgG 干扰。
所以开始IP实验之前,一定要先确定所选抗体适用于IP实验。 IP和WB在抗体稀释比上有不同,IP实验中抗体所需要的稀释比例比WB实验要小的多,一般情况下抗体和靶蛋白的比例要控制在1:10到1:100之间。如果抗体用量过多,可能会造成非特异性结合和背景干扰;如果抗体用量过少,则可能无法充分提取目标蛋白。 二、细胞或组织...
Co-IP的定义&用途 定义 免疫共沉淀技术是一种研究两种蛋白在体内是否存在相互作用的有效方法,通过抗体和已知蛋白结合,从而捕获整个已知蛋白复合物,进而研究复合物中与已知蛋白存在相互作用的蛋白。 用途 蛋白质相互作用:测定两种目标蛋白质是否在体内结合;